تصوير الطور الكمي ثلاثي الأبعاد لتوصيف الأنواع الفرعية للخلايا الليمفاوية

قم بتحميل معلق من النوع الفرعي للخلايا الليمفاوية في غرفة التصوير.

ضع الغرفة على مرحلة مجهر التصوير الكمي ثلاثي الأبعاد.

اضبط معلمات المجهر والمستوى البؤري للحصول على التصوير الأمثل.

أثناء تصوير الخلايا الليمفاوية ، ينقسم شعاع الليزر إلى حزم مرجعية وعينات.

يسمح جهاز المرايا الدقيقة الرقمي ، الذي يتميز بمصفوفة مرآة صغيرة في مسار شعاع العينة ، للحزمة بالدوران 360 درجة حول المحور البصري.

تخضع كل حزمة تمر عبر الخلايا الليمفاوية لتحول طور بناء على اختلافات معامل الانكسار داخل الخلية.

تتجمع العينة الناتجة والحزم المرجعية ، وتشكل صورة ثلاثية الأبعاد ثنائية الأبعاد.

يتم التقاط سلسلة من الصور المجسمة التي تحتوي على معلومات الطور والسعة من زوايا مختلفة من خلال دوران الحزمة حول الخلايا الليمفاوية.

الحصول على صور ثلاثية الأبعاد متعددة في الخلفية بزوايا إضاءة متفاوتة، باستثناء الخلايا الليمفاوية.

باستخدام خوارزمية التصوير المقطعي للحيود ، أعد بناء الصور المجسمة في مقطعي ثلاثي الأبعاد بمعامل الانكسار ثلاثي الأبعاد ، مما يوفر معلومات مورفولوجية وكيميائية حيوية للخلايا الليمفاوية دون الحاجة إلى وضع العلامات.

للحصول على التصوير الأمثل ، قم بتخفيف كل عينة خلية بتركيز 180 خلية لكل ميكرولتر من وسط RPMI ، وحقن 120 ميكرولترا ببطء من العينة المخففة الأولى في غرفة التصوير. بعد التأكد من عدم وجود فقاعات داخل الغرفة ، ضع قطرة من الماء المقطر على العدسة الموضوعية لمجهر الطور الكمي ثلاثي الأبعاد ، وضع غرفة التصوير على مرحلة ترجمة المجهر. اضبط المرحلة بحيث تتماشى العينة مع العدسة الشيئية، وانقر فوق التركيز البؤري والسطح في علامة التبويب معايرة في منظور المجهر لبرنامج التصوير، لضبط المواضع المحورية للهدف والعدسات المكثفة على التوالي.

انقر فوق الوضع التلقائي لمحاذاة الهدف والعدسات المكثفة. لتحسين المحاذاة، افتح وضع المسح الضوئي واضبط العدسات يدويا لمحاذاة نمط جهاز المرآة الدقيقة الرقمية مع المنتصف. ثم ارجع إلى الوضع العادي، واضبط مرحلة الترجمة لتحديد موقع خلية في مجال الرؤية. اضبط الموضع المحوري للعدسة الشيئية للعثور على المستوى البؤري حتى تصبح حدود العينة المرئية على الشاشة غير مرئية تقريبا.

من المهم ضبط تركيز الخلية بشكل مثالي لإنشاء مقطعي ثلاثي الأبعاد RI مثالي. إذا لم يتم التقاط الصورة بشكل صحيح ، إعاقة إعادة البناء ثلاثية الأبعاد ، مما يؤدي إلى تصوير مقطعي صاخب.

اضبط مرحلة الترجمة للعثور على موقع بدون خلية، وانقر فوق معايرة لقياس الصور المجسمة ثنائية الأبعاد متعددة بزوايا إضاءة مختلفة. اضبط مرحلة الترجمة لتحديد موقع خلية في وسط مجال الرؤية، وضمن علامة التبويب اكتساب، قم بتسمية العينة التي يتم تصويرها.

انقر فوق 3D Snapshot لقياس الصور المجسمة للخلية باستخدام نفس زوايا الإضاءة المستخدمة في الصور المجسمة ثنائية الأبعاد التي تم قياسها للتو. عندما تظهر البيانات المكتسبة في لوحة إدارة البيانات، انقر بزر الماوس الأيمن فوق البيانات، وانقر فوق عملية لإعادة بناء التصوير المقطعي لمعامل الانكسار ثلاثي الأبعاد من الصور المجسمة ثنائية الأبعاد باستخدام خوارزمية التصوير المقطعي للحيود المطبقة في برنامج التصوير. بعد التصوير، في لوحة إدارة البيانات، انقر بزر الماوس الأيمن فوق البيانات وانقر فوق فتح لتصور البيانات.

انقر فوق منتصف الخلية لتغيير موضعها، ثم انقر فوق RI Tomogram في لوحة Data Manager. في علامة التبويب Preset (الإعداد المسبق)، انقر فوق Load (تحميل) وانقر نقرا مزدوجا فوق lymphocytes.xml، وهي وظيفة نقل محددة مسبقا يوفرها برنامج التصوير لتصور المخطط المقطعي وفقا لتوزيعات 3D RI. قم بتمرير الماوس للتكبير، واسحب الخلية لتدويرها في أي اتجاه.