تقنية لاستخراج الحمض النووي بوساطة الجسيمات الزجاجية المغناطيسية من الدم

خذ أنبوبا يحتوي على دم بشري مسحوب حديثا وأضف عازلة للتحلل.

يتخلل المنظف الموجود في المخزن المؤقت غشاء الخلية ، ويتحلل الخلايا ويطلق الأحماض النووية داخل الخلايا ، أو NAs ، والنوكليازات.

العوامل الفوضوية في المخزن المؤقت تشوه النوكليازات ، مما يمنع تدهور NA.

أضف جزيئات الزجاج المغناطيسي أو MGPs - الجسيمات المغناطيسية المطلية بالسيليكا - واخلطها جيدا.

يعمل

الرقم الهيدروجيني المنخفض للمخزن المؤقت على بروتونات السيليكا ، مما يجعل شحنة موجبة على سطح MGPs.

ترتبط NAs سالبة الشحنة إلكتروستاتيكيا بالسطح المشحون ، وتشكل مركب NA-MGP.

تحت المجال المغناطيسي ، تتجمع مجمعات NA-MGP على جانب الأنبوب.

تخلص من المادة الطافية التي تحتوي على بقايا الخلايا والبروتينات.

قم بإجراء خطوات غسيل متعددة عن طريق إعادة تعليق مجمعات NA-MGP في مخزن مؤقت للغسيل ، وتطبيق مجال مغناطيسي لجمع المجمعات ، والتخلص من المادة الطافية مع الملوثات المتبقية.

إعادة تعليق المجمعات في مخزن مؤقت للشطف. يعطل الرقم الهيدروجيني المرتفع تفاعل NA-MGP ، مما يؤدي إلى إطلاق NAs. NAs المخفوع جاهزة لإجراء فحوصات المصب.

لتنقية الأحماض النووية من الدم الذي تم جمعه ، قم مرة أخرى بخلط محتويات الأنبوب عن طريق قلب الأنبوب المفرغ يدويا من 5 إلى 10 مرات. صب كمية المحضرة من MGPs مباشرة في أنبوب جمع الدم ، ثم ضع غطاءا جديدا من أنبوب جمع الدم غير المستخدم على الأنبوب الذي يحتوي على العينة. ضع إصبعا على الغطاء للتأكد من إغلاق الأنبوب بإحكام ، واخلط محتويات الأنبوب عن طريق التقليب من 5 إلى 10 مرات.

ضع الأنبوب في الحامل المغناطيسي واحتفظ بإصبعك على الغطاء للتأكد من إغلاق الأنبوب بإحكام. بعد ذلك ، اقلب الحامل المغناطيسي بالأنبوب عدة مرات لتفريق MGPs قبل أن تتجمع على جانب الأنبوب باستخدام المغناطيس. قم بإزالة غطاء الأنبوب وتخلص من محتويات الأنبوب في أنبوب تجميع سعة 50 مليلتر باستخدام ماصة يمكن التخلص منها.

صب الكمية المحضرة من WB1 مباشرة في أنبوب جمع الدم ، وأغلق الغطاء على الأنبوب. امزج المحتوى يدويا من 5 إلى 10 مرات. ثم اجمع الخرزات على جانب الأنبوب باستخدام المغناطيس ، وقم بإزالة السائل كما كان من قبل. أعد تعليق الخرزات في الكمية المعدة ل WB2. بعد ذلك ، تخلص من المحلول ، وكرر الإجراء مع الاقتباس المحضر ل WB3.

أخيرا ، قم بإزالة الأنبوب من الحامل المغناطيسي وصب الكمية المحضرة من EB مباشرة في أنبوب جمع الدم. ضع الغطاء على الأنبوب ، وأعد تعليق MGPs عن طريق النقر من 5 إلى 10 مرات بإصبع. أخيرا ، استخدم ماصة يمكن التخلص منها سعة 1.5 ملليلتر لنقل قطرة واحدة من MGPs المعلقة إلى مزيج تفاعل تضخيم الحمض النووي النهائي.