موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 3:10 دقيقة • July 8th, 2025
خذ صفيحة متعددة الآبار تحتوي على شرائح رئة بشرية مقطوعة بدقة ، والتي تحافظ على الهندسة المعمارية الدقيقة للرئة الأصلية.
إزالة الوسائط. أضف تركيزات عامل اختبار متزايدة إلى الآبار واحتضنها.
اعتمادا على إمكاناته السامة للخلايا ، يعطل عامل الاختبار أغشية الخلايا ، مما يؤدي إلى موت الخلايا وتقليل الخلايا القابلة للحياة داخل الشرائح.
بعد الحضانة ، قم بإزالة الوسائط. اغمر الشرائح في وسائط تحتوي على ملح التيترازوليوم القابل للذوبان في الماء ، أو WST-1 ، وكاشف اقتران الإلكترون.
حضن. في الخلايا النشطة الأيضية ، ينقل نظام نقل الإلكترون في غشاء البلازما الإلكترونات من NADH داخل الخلايا إلى كاشف اقتران الإلكترون خارج الخلية ، مما يقلل من الصبغة غير المنفذة للخلية WST-1 إلى فورميزان مستقر ، أصفر داكن ، قابل للذوبان في الماء.
بعد الحضانة ، رج الطبق لتوزيع الفورمازان بالتساوي ونقله إلى طبق متعدد الآبار.
باستخدام قارئ صفيحة دقيقة ، قم بقياس امتصاص الفورميزان ، مما يدل على صلاحية الأنسجة.
يشيرانخفاض امتصاص الفورمازان ، اعتمادا على تركيز عامل الاختبار ، إلى انخفاض قابلية صلاحية شريحة الرئة ، مما يؤكد السمية الخلوية لعامل الاختبار.
لتحضير مزيج رئيسي من محلول العمل ، قم بتخفيف 25 ميكرولترا من كاشف WST-1 و 225 ميكرولتر من الوسط لكل بئر. بعد ذلك ، قم بتعبئة 250 ميكرولتر من محلول عمل الخلط الرئيسي ل WST-
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية