موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 2:40 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بإضافة عامل دوائي معدل للمناعة إلى الخلايا المتغصنة غير الناضجة ، أو DCs.
تعبر DCs عن مركب التوافق النسيجي الرئيسي ، أو جزيء معقد التوافق النسيجي الكبير من الفئة الثانية والجزيئات التحفيزية المشتركة ، وهي ضرورية لتعزيز تكاثر الخلايا التائية أثناء الاستجابات المناعية.
يتفاعل العامل المناعي مع التيار المستمر ويؤدي إلى تقليل تنظيم معقد التوافق النسيجي الكبير من الفئة الثانية وتعبير الجزيئات التحفيزي المشترك ، وبالتالي تحويل التيار المستمر إلى خلية تغصنية تحمل المنشأ أو TolDC.
الزراعة المشتركة TolDCs مع خلايا CD4 + T الساذجة.
أضف ببتيد مستضد إلى الثقافة المشتركة.
تستوعب TolDCs الببتيد ، ثم تعالج وتحمل المستضد الناتج على جزيء معقد التوافق النسيجي الكبير.
ينتقل جزيء معقد التوافق النسيجي الكبير المرتبط بالمستضد إلى غشاء الخلية.
تتفاعل خلايا CD4 + T الساذجة مباشرة مع مركب مستضد معقد التوافق النسيجي الكبير على TolDCs.
يتيح التفاعل مع جزيء التحفيز المشترك على التيار المستمر الناضج التنشيط الكامل للخلية التائية الساذجة.
بدون التحفيز المشترك ، تظل الخلية التائية CD4 + الساذجة نائمة ولا يمكنها بدء استجابة مناعية ضد المستضد المقدم.
أعد تعليق الخلايا بتركيز 2 × 105 خلايا شجيرية لكل مليلتر ، ومعالجتها بالتركيز التجريبي المناسب للثلاثي التربينويد ذي الأهمية لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية.
خلال الثلث الأخير من الحضانة ، قم بإعادة تعليق الخلايا التائية عند تركيز 1 × 107 خلايا لكل مليلتر و 1 ميكرومولار CFSE لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة مئوية. بعد ذلك ، اغسل الخلايا باستخدام PBS وأعد ضبط الحجم إلى تركيز نهائي يبلغ 2 × 106 خلايا T لكل مليلتر.
الزراعة المشتركة 100 ميكرولتر من الخلايا المتغصنة المعالجة مع 100 ميكرولتر من الخلايا التائية CD4 CD4 الموجبة للتصنيف CFSE في كل بئر من صفيحة 96 بئرا ، وإضافة 100 نانوجرام لكل ملليلتر من ببتيد OVA 322-329 إلى الخلايا ، وقياس شدة CFSE للخلايا التائية عن طريق قياس التدفق الخلوي بعد 2 إلى 3 أيام من الحضانة.