مراقبة تنشيط الخلايا البائية باستخدام الجسيمات الشحمية المستضدية باستخدام مقايسة تدفق الكالسيوم

خذ خلايا الطحال المستنفدة لخلايا الدم الحمراء في مخزن مؤقت يحتوي على صبغة فلورية حساسة للكالسيوم في الخلية ، Indo-1 AM.

تشق الإستيرازات داخل الخلايا Indo-1 AM إلى Indo-1 غير منفذ للغشاء ، والذي يرتبط بأيونات الكالسيوم ، مما يؤدي إلى تغيير إشارة Indo-1 المضان من الأزرق إلى البنفسجي.

إدخال الأجسام المضادة الخاصة بالمستضد المترافق بالفلوروفور والتي ترتبط على وجه التحديد بالمستضدات المعنية على الخلايا.

باستخدام قياس التدفق الخلوي ، حدد الخلايا البائية المسماة بالفلوروفور وقم بقياس نسبة التألق الهندي -1 البنفسجي إلى الأزرق.

الآن ، عالج الخلايا بالجسيمات الشحمية المستضدية التي تتكون من شظايا IgM Fab المترافقة مع طبقات ثنائية الجسيمات الشحمية.

ترتبط مستقبلات الخلايا البائية بالمستضدات المقترنة بالجسيمات الشحمية ، مما يؤدي إلى تنشيط كينازات التيروزين السيتوبلازمية المرتبطة بها وتحفيز تنشيط فوسفوليباز-سي جاما -2.

يشق الفوسفوليباز-ج المنشط الغشاء فوسفوليبيد ، فوسفاتيديلينوسيتول 4،5-ثنائي الفوسفات ، مما يولد رسل ثان ، بما في ذلك الإينوزيتول 1،4،5- ثلاثي الفوسفات ، أو IP3.

يرتبط IP3 بقنوات الكالسيوم ذات البوابات IP3 على الشبكة الإندوبلازمية ، مما يؤدي إلى إطلاق أيونات الكالسيوم في السيتوبلازم.

تربط أيونات الكالسيوم هذه جزيئات Indo-1 غير المرتبطة ، مما يزيد من التألق البنفسجي.

تؤكد

نسبة التألق