تركيز البروتين المزروع البكتيرية باستخدام جهاز الترشيح الفائق

خذ جهاز مرشح طرد مركزي كبير الحجم يحتوي على أغشية السليلوز الرأسية المتجددة بحجم مسام مناسب.

أضف المخزن المؤقت والطرد المركزي. قم بإزالة مرطب الغشاء المحتوي على التدفق.

قم بتحميل الجهاز ببروتين ترشيح المزرعة البكتيرية ، أو CFP ، بما في ذلك البروتينات القابلة للذوبان والحويصلات خارج الخلية ، أو EVs - هياكل مرتبطة بالدهون بحجم نانوي تحتوي على جزيئات حيوية تفرزها البكتيريا.

أثناء الطرد المركزي ، يمر CFP بشكل عرضي عبر الأغشية عبر قوة الطرد المركزي.

تمر الجزيئات الحيوية الأصغر من مسام الغشاء مع سائل الاستزراع ، بينما تمر الجزيئات الأكبر حجما ، مثل المركبات الكهربائية ، فوق سطح الغشاء ، مما يقلل من انسداد الغشاء.

يركز

المرشح CFP في الحد الأدنى من حجم الجهاز ، بمساعدة حجمه المسدود لمنع جفاف الجزيئات الحيوية.

أضف المخزن المؤقت والطرد المركزي.

يحل المخزن المؤقت محل مكونات الوسائط المتبقية ، مما يخلق بيئة متساوية التوتر للجزيئات الحيوية CFP ويحافظ على سلامتها.

ضع كوب التركيز فوق كوب الفلتر ، واقلبها ، وجهاز الطرد المركزي. استعادة الاحتفاظ CFP المركز لمزيد من التحليل.

للبدء ، قم بإعداد مرشح طرد مركزي بوزن جزيئي 100 كيلودالتون عن طريق إضافة سعة الحجم الكاملة ل PBS. جهاز طرد مركزي لمدة خمس دقائق عند 2,800 مرة جم عند 4 درجات مئوية. تخلص من التدفق من خلال أي برنامج تلفزيوني متبقي ، واملأ غرفة العينة ب Mtb CFP إلى أقصى سعة. جهاز طرد مركزي عند 2,800 مرة جم عند 4 درجات مئوية حتى ينخفض الحجم إلى الحد الأدنى لحجم جهاز الترشيح الفائق. كرر حسب الضرورة حتى يتم تقليل العينة بأكملها بشكل كاف.

أضف 1x PBS إلى وحدة المرشح التي تحتوي على التركيز حتى السعة الإجمالية للجهاز. قلل مستوى الصوت كما هو موضح من قبل وكرر هذه الخطوة خمس مرات لضمان الغسيل الكامل وتبادل العازلة. بعد ذلك ، استرجع 100 كيلودالتون مركز CFP ، أو 100R ، وفقا لمواصفات جهاز الترشيح الفائق. اغسل الفلتر بحجم لا يقل عن 1x PBS ثلاث مرات على الأقل ، واسحب الغسيل باستخدام 100R لتحقيق أقصى قدر من الاسترداد.