تقنية لتحديد العدوى الفطرية في يرقات الزرد

خذ يرقة الزرد المحقونة بجراثيم فطرية في البطين الخلفي للدماغ.

يتم تجنيد البلاعم في موقع الحقن ، وتشكيل مجموعة ضيقة حول الجراثيم.

تخضع الجراثيم لابلاع البلعمة بواسطة الضامة.

تتمتع هذه الجراثيم بالقدرة على مقاومة التحلل داخل البلعمة ، مما يسمح لها بالإنبات في خيوط والحث على موت الخلايا النخرية للبلاعم.

تمتلك

الخيوط أنماطا جزيئية مكشوفة مرتبطة بمسببات الأمراض ، أو PAMPs ، على سطحها.

يتم

تجنيد العدلات في موقع العدوى ، والتعرف على PAMPs وربطها. يؤدي الاتصال بالعدلات إلى نمط ظاهري معقد شديد التفرع في الخيوط ، مما يعيق ابتلاعها بواسطة العدلات ويسهل التهرب المناعي.

تجانس اليرقة ، وإطلاق الجراثيم الفطرية والخيوط القابلة للحياة. جهاز طرد مركزي لإزالة الحطام الخلوي ووضع المادة الطافية على وسط النمو.

عند الحضانة ، قم بحساب وحدات تشكيل مستعمرة الفطريات أو CFUs.

تمثل أعداد CFU عدد الجراثيم الفطرية القابلة للحياة التي تهربت من الدفاعات المناعية للمضيف.

مباشرة بعد الحقن ، انقل ثمانية من اليرقات إلى أنابيب فردية سعة 1.7 مليلتر ، وقم بالقتل الرحيم لها. تحضير 1 مليلتر من PBS مع الأمبيسلين والكاناميسين. قم بإزالة أكبر قدر ممكن من السوائل من الأنابيب مع اليرقات. ثم أضف 90 ميكرولترا من PBS مع المضادات الحيوية.

قم بتجانس اليرقات في محلل الأنسجة بمعدل 1,800 تذبذب في الدقيقة لمدة 6 دقائق. ثم قم بتدويرها عند 17,000 مرة جم لمدة 30 ثانية. قم بعمل التعليق المتجانس من كل أنبوب إلى منتصف لوحة GMM ذات علامة ، ونشرها باستخدام موزعة على شكل حرف L يمكن التخلص منها ، مع الحرص على تجنب الانتشار على الحافة. احتضان الألواح رأسا على عقب عند 37 درجة مئوية لمدة 2 إلى 3 أيام. ثم احسب عدد المستعمرات المتكونة.