تقنية zWEDGI لتصور يرقات الزرد المصابة بممرضات الفطريات

ابدأ بيرقات سمك الزرد المعدلة وراثيا التي تعبر عن الخلايا المناعية ذات العلامات الفلورية الموسومة بعلامات فلورسنت فريدة من نوعها للتتبع الدقيق.

يتم حقن اليرقات مسبقا ببروتين فلوري أحمر يعبر عن جراثيم الرشاشيات في دماغها الخلفي.

داخل الدماغ الخلفي ، تحاكي الجراثيم الفطرية الالتهاب الموضعي وتجذب الخلايا المناعية ، بما في ذلك البلاعم ، التي تتسبب في جراثيم البلعمة لإزالتها.

بينما يستمر عدد قليل من الجراثيم وتنبت في خيوط ، وتطلق جزيئات مشتقة من مسببات الأمراض وتجذب العدلات إلى موقع الإصابة.

نقل يرقة مخدرة إلى غرفة التحميل المحتوية على الوسط لجهاز جرح وانحباس أسماك الزرد للنمو والتصوير ، أو zWEDGI ، جهاز متصل بغرفة الجرح عبر قناة تقييد.

قم بتأمين اليرقة داخل قناة التقييد في اتجاه ظهري جانبي لتصوير الدماغ الخلفي.

في المراحل المبكرة ، يمثل التألق الأحمر الجراثيم الفطرية ، بينما يؤكد التألق الأخضر تجنيد البلاعم في موقع العدوى.

بمرور الوقت ، يشير انتشار التألق الأحمر إلى تطور العدوى ، بينما يشير ظهور مضان أزرق إضافي إلى تجنيد العدلات.

في يوم التصوير ، قم بإعداد طبق بتري مقاس 3.5 ملم مع 100 ميكرومولار PTU وواحد مع E3-tricaine. أضف E3-tricaine إلى غرف جهاز zWEDGI ، واستخدم ماصة دقيقة P100 لإزالة فقاعات الهواء من الغرف وقناة التقييد ، ثم قم بإزالة كل E3-tricaine الزائدة خارج الغرف

ماصة يرقة واحدة وانقلها إلى الطبق باستخدام E3 PTU ، ثم انقلها إلى E3-tricaine بأقل قدر ممكن من السائل. بعد 30 ثانية ، انقل اليرقات المخدرة إلى غرفة التحميل الخاصة بجهاز الجرح والفخ.

قم بإزالة E3-tricaine من غرفة الجرح ، ثم حررها في غرفة التحميل لتحريك ذيل اليرقات إلى قناة التقييد. تأكد من وضع اليرقة على جانبها الجانبي أو الظهري أو الظهري الجانبي بحيث يمكن تصوير الدماغ الخلفي بعدسة شيئية مقلوبة.

بعد تصوير اليرقة بمجهر متحد البؤر ، أطلق E3-tricaine في غرفة الجرح لدفع اليرقة من قناة التقييد إلى غرفة التحميل. التقط اليرقة وانقلها مرة أخرى إلى الطبق باستخدام E3-tricaine ، ثم انقلها إلى الطبق باستخدام E3 PTU بأقل قدر ممكن من السوائل. اشطفه في PTU وانقله مرة أخرى إلى الطبق المكون من 48 بئرا.