تقييم تنشيط الخلايا التائية الخاضعة للرقابة باستخدام معقد التوافق النسيجي الكبير الببتيد القابل للتنشيط الضوئي

ابدأ بطلاء غطاء زجاجي ببولي إل ليسين البيوتينيل لإنشاء سطح غني بالبيوتين.

بعد ذلك ، أدخل الستربتافيدين - وهو بروتين يرتبط بالبيوتين ، ويشكل جسرا جزيئيا للتفاعلات اللاحقة.

بعد ذلك ، أضف الببتيدات المقفصة باللون البيوتينيل المرتبطة بمجمعات التوافق النسيجي الرئيسية - pMHCs جنبا إلى جنب مع جزيئات الالتصاق.

تتفاعل روابط pMHC الحيوية وجزيئات الالتصاق مع مناطق معينة على الستربتافيدين ، مما يتيح تجميدها.

بعد ذلك ، اغسل الغطاء بمحلول ملحي مخزن بشكل متكرر وأدخل الخلايا التائية.

إن وجود قفص ضوئي ، وهو مجموعة كيميائية حساسة للضوء مرتبطة ببقايا معينة على الببتيد ، يعيق الارتباط التلقائي لمستقبل الخلية التائية بالببتيد.

لتنشيط الخلايا التائية الخاضعة للرقابة ، قم بتعريض الببتيدات المقفصة للأشعة فوق البنفسجية.

يكسر ضوء الأشعة فوق البنفسجية الرابطة الكيميائية بين مركب الببتيد الضوئي ، مما يكشف الشكل الأصلي للببتيد.

تحدد مستقبلات الخلايا التائية الببتيدات المكشوفة وترتبط بها ، بينما ترتبط الإنتجرينات بجزيئات الالتصاق ، مما يؤدي إلى تنشيط الخلايا التائية.

ابدأ بإضافة بولي إل ليسين البيوتينيل أو bio-PLL المخفف من 1 إلى 500 في الماء المقطر منزوع الأيونات إلى 8 زجاج غطاء بغرف 8 آبار. احتضن لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. بعد الحضانة ، يغسل بالماء المقطر منزوع الأيونات ، ثم يجفف لمدة ساعتين في درجة