موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 4:34 دقيقة • July 8th, 2025
خذ صفيحة متعددة الآبار تحتوي على خلايا الساركوما العظمية الملتصقة على الغطاء.
تتم معالجة خلايا سرطان العظام هذه مسبقا بمادة كيميائية مسببة للإجهاد ، مما يؤدي إلى تكوين حبيبات الإجهاد.
حبيبات الإجهاد عبارة عن عضيات خالية من الغشاء السيتوبلازمي تتكون من mRNAs غير مترجمة ، ووحدات فرعية ريبوسومية صغيرة ، وبروتينات مرتبطة بالحمض النووي الريبي ، أو RBPs ، وعوامل متعلقة بالترجمة ، وبروتينات الإشارات.
تخلص من الوسائط واغسل الخلايا بمخزن مؤقت. إصلاح الخلايا للحفاظ على التشكل الخلوي.
تخلل الخلايا للوصول إلى الأهداف داخل الخلايا. أضف البروتينات المانعة لمنع ارتباط الأجسام المضادة غير المحددة.
إدخال الأجسام المضادة الأولية التي ترتبط ب RBPs محددة وعوامل متعلقة بالترجمة داخل حبيبات الإجهاد.
احتضان الأجسام المضادة الثانوية المختلفة المسماة بالفلوروفور وصبغة Hoechst.
ترتبط الأجسام المضادة الثانوية بالأجسام المضادة الأولية المرتبطة بالبروتينات المرتبطة بحبيبات الإجهاد ، بينما تلطخ جزيئات Hoechst الحمض النووي.
قم بتركيب أغطية تحتوي على خلية باستخدام وسائط التثبيت.
باستخدام المجهر الفلوري ، راقب الخلايا لتصور وقياس حبيبات الإجهاد ، والتي تظهر على شكل بؤر فلورية تتميز بالتوطين المشترك للبروتينات المرتبطة بها.
لإصلاح الخلايا ، قم بإزالة الوسائط من الآبار ، واغسل الخلايا بحوالي 250 ميكرولتر من PBS. أضف
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية