موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 2:55 دقيقة • July 8th, 2025
قم بإذابة أوراق الترشيح التي تحتوي على سائل بطانة الغشاء المخاطي للأنف الممتص على الجليد لمنع تدهور العينة.
يتكون السائل من وسطاء مناعي ، بما في ذلك الكيموكينات والسيتوكينات.
اغمر أوراق الترشيح في مخزن مؤقت. انقل المحتويات إلى مرشحات الأنبوب. جهاز طرد مركزي لتصفية سائل البطانة المخاطية من ورق الترشيح.
أضف مستخلص الأنف المصفى إلى لوحة الفحص المزخرفة بمجموعة من الأجسام المضادة الخاصة بالوسيط.
ترتبط الوسطاء المناعيون بالأجسام المضادة المقابلة لها.
إدخال الأجسام المضادة للكشف المسمى بمركب الروثينيوم ، والتي ترتبط بالوسطاء المعنيين.
أضف المخزن المؤقت القائم على tris الذي يحتوي على tripropylamine ، أو TPA.
عندما يتم تطبيق جهد عبر الأقطاب الكهربائية ، يخضع مركب الروثينيوم و TPA للأكسدة.
يثير جذر TPA الناتج مركب الروثينيوم.
عند العودة إلى حالته الأرضية ، ينبعث مركب الروثينيوم من الفوتونات.
تتناسب شدة الضوء المقاسة مع تركيز الوسيط المناعي المحدد في سائل البطانة المخاطية.
لقياس الوسيط المناعي لمجرى الهواء ، ضع ما يصل إلى 10 عينات من سالب 80 درجة مئوية على الجليد ، وسجل أرقام التعريف الخاصة بها. عندما يتم إذابة العينات، اغمر كل من ورقتي الترشيح لكل موضوع في 150 ميكرولتر من المخزن المؤقت المحضر حديثا لكل ورق ترشيح.
استكمله بقرص واحد كامل مثبط للبروتياز لكل 25 مل من محلول المخزون العازل. انقل العينات إلى شاكر الألواح بسرعة 400 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق. انقل المخزن المؤقت وأوراق الترشيح إلى أكواب مرشحات أنبوب أسيتات السليلوز الفردية.
قمبالطرد المركزي للعينات لجمع مستخلص الأنف المصفى في الجزء السفلي من أنابيب الطرد المركزي الدقيقة. ثم قم بإزالة الأكواب وضع الأنابيب على الثلج. بعد ذلك ، قم بنقل 150 ميكرولتر من مستخلص الأنف إلى آبار فردية من ألواح التخزين منخفضة البروتين ، وقم بتخزين الألواح عند سالب 80 درجة مئوية حتى التحليل. بعد ذلك ، قم بقياس تركيز الوسطاء المناعيين الأنفية ذات الأهمية بواسطة مصفوفة متعددة الإرسال عالية الحساسية قائمة على التلألؤ الكيميائي الكهربائي ، وفقا لبروتوكولات الفحص القياسية.