مقايسة انقسام الببتيد الفلوروجينيك لفحص النشاط المحلل للبروتياز

تحتوي

الفيروسات المغلفة ببروتينات سبايك عبر الغشاء على موقع انقسام محلل للبروتين.

تشق البروتياز المرتبطة بالغشاء على الخلايا المضيفة بروتينات السنبلة ، مما يكشف عن ببتيدات الاندماج التي تسهل دخول الفيروس.

للبدء ، خذ الببتيدات البرية مع موقع الانقسام المتعارف عليه والببتيدات المتغيرة ، كل منها يحمل طفرة فريدة في الموقع.

تحتوي

الببتيدات الفلورية على فلوروفور ومرويد. بسبب القرب ، يمتص المروي مضان الفلوروفور.

خذ صفيحة متعددة الآبار على الثلج ، تحتوي على عازلة الفحص والبروتياز المضيف.

أضف الببتيدات البرية والمتغيرة في آبار منفصلة. احتضان في درجة حرارة مناسبة لنشاط البروتياز الأمثل.

يشق البروتياز الببتيدات ، ويفصل المروي عن الفلوروفور ويتيح انبعاثه الفلوري.

قم بقياس التغيير في إشارة التألق لتحديد معدل الانقسام المحلل للبروتين.

يشير المعدل الأعلى للتسلسل من النوع البري إلى نشاط تحلل البروتين أعلى ، بينما يشير المعدل المنخفض للمتغيرات إلى تغيير كفاءة الانقسام.

قم بإعداد المخازن المؤقتة المناسبة للبروتيازات كما هو موضح في بروتوكول النص ، وقم بتبريد المخازن المؤقتة على الجليد. ضع صفيحة مسطحة من البوليسترين الأسود الصلب غير المعالجة ذات 96 بئرا على الثلج مع صفيحة معدنية رفيعة تحتها لدعم التبريد والثبات.

من الضروري استخدام الصفيحة السوداء كلوحة فحص لمنع تسرب الفلورسنت من الآبار المجاورة.

لكل ب