اختبار في المختبر لقياس نشاط بروتياز العدلات سيرين باستخدام مبلغ الفلورسنت
موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 2:59 دقيقة • July 8th, 2025
خذ صفيحة دقيقة تحتوي على بروتياز سيرين العدلات أو NSPs. تعمل هذه الإنزيمات القابلة للذوبان ذات النشاط المحلل للبروتين ، والتي تفرزها العدلات ، في الاستجابات الالتهابية.
أضف مجسات مراسل الفلورسنت التي تحمل فكرة التعرف التي تعمل كموقع انقسام ل NSPs. يتم اقتران المجسات مع متبرع وفلوروفور متقبل.
عند الإثارة بطول موجي معين ، ينبعث الفلوروفور المانح من الطاقة. نظرا لقربه من المتبرع ، يمتص الفلوروفور المتقبل الطاقة وينبعث منه مضان بطول موجي مختلف.
الكشف عن إشارات المتبرع والمستقبل بشكل منفصل وحساب نسبة المتبرع إلى المستقبل لتقييم نشاط NSP. تشير النسبة المنخفضة إلى تبريد مضان المتبرع في حالة عدم وجود انقسام المسبار.
يتعرف NSPs على فكرة التعرف على المجسات وتشققها ، مما يؤدي إلى إطلاق المقبول.
تتيح المسافة من المستقبل انبعاث التألق من فلوروفور المتبرع ، مما يزيد من نسبة المتبرع إلى المستقبل. تشير النسبة العالية إلى انقسام المسبار الفعال من قبل NSPs.
قم بإذابة الإنزيمات على الجليد ، وقم بإعداد منحنى قياسي للإنزيم كما هو موضح في المخطوطة النصية. بالتوازي مع المستحضر القياسي ، قم بتخفيف عينات البلغم في مخزن التنشيط. على قارئ اللوحة ، اضبط الطول الموجي للإثارة لمسبار NEmo-1 NEmo-1 على 354 نانومتر والطول الموجي للانبعاث على 400 نانومتر للمتبرع و 490 نانومتر للمتقبل.
بالنسبة لمسبار CG FRET sSAM ،
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية