استخدام مضان الحمض النووي الريبي المناعي في الموقع لتصور SARS-CoV-2
موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 2:59 دقيقة • July 8th, 2025
خذ خلايا فيرو الثابتة والمتنفذة المصابة بفيروس كورونا - وهي سلسلة خلايا ثدييات تعاني من نقص الإنترفيرون.
داخل المضيف ، يوجد الحمض النووي الريبي الفيروسي على شكل جزيئات الحمض النووي الريبي الفرعي أو sgRNAs ، وهي جزيئات الحمض النووي الريبي متوسطة الطول تشفر بروتينات فيروسية معينة يتم تصنيعها عن طريق النسخ.
أضف تفاعل التهجين المتسلسل أو مجسات بادئ HCR.
يرتبط مسبار HCR بتسلسله التكميلي على الحمض النووي الريبي المستهدف.
إدخال مجسات دبوس شعر قليل النوكليوتيد المسمى بالفلورسنت ، H-1 و H-2.
يرتبط مسبار البادئ بذيله H1 التكميلي ، مما يؤدي إلى خطية هيكل دبوس الشعر.
يرتبط تسلسل H1 المكشوف بذيله H2 التكميلي.
يستمر تسلسل H2 الزائدة في الارتباط بذيل H1 ، مما يؤدي إلى تضخيم المجسات ذات العلامات الفلورية حول المنطقة المستهدفة ، وتوليد إشارة قوية.
أضف أجساما مضادة مناسبة لتصور الهيكل الخلوي للخلية المضيفة.
تلطيخ النوى باستخدام DAPI.
تحت المجهر الفلوري ، تظهر الخلايا المصابة بالفيروس تألق أحمر في السيتوبلازم ، مما يشير إلى وجود الحمض النووي الريبي المستهدف.
بعد تثبيت الخلايا ونفاذيتها ، كما هو موضح في المخطوطة النصية ، قم بإزالة محلول 1x PBS من الآبار ، وأضف ما لا يقل عن 300 ميكرولتر من مخزن التضخيم إلى كل بئر. احتضان العينات لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. قم بإعداد كل دبوس شعر HCR عن طريق تبري
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية