مقايسة للكشف عن إنتاج أنواع الأكسجين التفاعلية في أنسجة الأرز عند الاستنباط المناعي

خذ صفيحة دقيقة تحتوي على شرائح غمد موحدة مقطوعة من شتلات الأرز وأقراص الأوراق التي تم الحصول عليها من أوراق نبات الأرز.

أضف الماء المعقم واحتضنه طوال الليل للسماح بالتعافي من إجهاد الجرح.

أضف ببتيد مناعي مشتق من السوط البكتيري الذي يعمل كنمط جزيئي مرتبط بالعامل الممرض أو PAMP.

ترتبط الخلايا النباتية عند الحواف المقطوعة ب PAMPs عبر مستقبلات التعرف على الأنماط.

يؤدي

الارتباط إلى تشغيل إشارات المصب ، مما يؤدي إلى تنشيط إنزيم موضعي لغشاء البلازما يسمى متماثل أوكسيديز الانفجار التنفسي أو RBOH.

ينتج RBOH المنشط أنواع الأكسجين التفاعلية أو ROS في الأابوبلاست - الفضاء بين الخلايا. يتم تحويل ROS المنتج إلى بيروكسيد الهيدروجين.

أضف إنزيم بيروكسيداز وركيزة

كيميائية. يستخدم

بيروكسيداز بيروكسيداز الهيدروجين لتحويل الركيزة إلى حالة وسيطة مثارة ، والتي تطلق الطاقة كضوء وتعود إلى الحالة الأرضية.

قم بقياس اللمعان في كلا النوعين من الأنسجة للكشف عن الزيادة الحادة مباشرة بعد علاج PAMP ، مما يشير إلى انفجار ROS.

قم بتقطيع الغمد من شتلات الأرز التي يبلغ عمرها 10 أيام إلى شرائح بحجم 3 ملم بشفرة حلاقة حادة أو شفرة جراحية للمعالجة المسبقة قبل يوم واحد من اختبار ROS. ضع 5 أجزاء غمد في بئر فردي من صفيحة ميكروتيتر مكونة من 96 بئرا تحتوي على 100 ميكرولتر من الماء المقطر المزدوج لمدة 10 إلى 12 ساعة.

قم بقص أقر