فحص تحلل الخلايا في المختبر في الوقت الحقيقي لتقييم فاعلية الخلايا التائية CAR

ابدأ بوسط زراعة الخلايا يحتوي على صفيحة إلكترونية - صفيحة بها أقطاب كهربائية ذهبية في قاع كل بئر.

قم بزرع اللوحة بالخلايا السرطانية المستهدفة ، وتلتزم بالأقطاب الكهربائية الدقيقة الذهبية ، وتشكل حاجزا ماديا بين الأقطاب الكهربائية.

انقل اللوحة إلى محلل الخلية وقم بتطبيق إشارة كهربائية.

تعطل الخلايا الملتصقة تدفق الإلكترون بين الأقطاب الكهربائية ، مما يؤدي إلى إعاقة تدفق الإلكترونات ، والتي تقاس على أنها مقاومة.

مع تكاثر هذه الخلايا والالتصاق بالأقطاب الكهربائية ، تزداد المعاوقة الكهربائية بشكل متناسب مع عدد الخلية الملتصقة ، مما يتيح القياس في الوقت الفعلي.

إدخال الخلايا التائية لمستقبلات المستضد الخيمري أو الخلايا التائية CAR التي تعبر عن مستقبلات المستضد الخيمري. تتفاعل هذه المستقبلات مع مستضدات الخلايا السرطانية ، وتنشط الخلايا التائية ، وتشكل مشبك مناعي.

تطلق الخلايا التائية المستضدة المستضدة المستضدة المستضدة المنشطة مواد سامة للخلايا ، بما في ذلك البيرفورينات والجرانزيم.

تشكل البرفورينات مساما في غشاء الخلية السرطانية ، مما يسهل دخول الجرانزيم إلى الخلايا والحث على تحلل الخلايا.

هذا يعزز انفصال الخلايا ، ويقلل من المعاوقة الكهربائية ، ويرتبط بإمكانية التحلل الخلوي للخلايا التائية CAR.

للحصول على مقايسة فاعلية التحلل الخلوي في الوقت الفعلي ، أضف 50 إلى 100 ميكرولتر من وسط زراعة الخلايا المستهدفة إلى كل بئر من اللوحة الإلكترونية ، وقم بقياس مقاومة الخلفية في أداة محلل الخلية.

افصل الخلايا السرطانية المستهدفة عن لوحة الثقافة باستخدام التربسين. اغسل الخلايا في 15 مل من وسط الاستزراع الطازج وأجهزة الطرد المركزي. أعد تعليق حبيبات الخلية السرطانية في 5 ملليلتر من الوسط الطازج للعد وضبط كثافة الخلية على تركيز الخلية المستهدفة المناسب. أضف الخلايا إلى العدد المناسب من الآبار ، واترك الصفيحة الإلكترونية لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة للسماح للخلايا بالاستقرار بالتساوي في قاع الآبار.

في نهاية فترة التوازن ، ضع اللوحة في محلل الخلية في الوقت الفعلي ، وابدأ قياس المعاوقة تلقائيا كل 15 دقيقة بين عشية وضحاها. يمكن تتبع التصاق وتكاثر الخلايا المستهدفة في الوقت الفعلي.

في صباح اليوم التالي ، قم بتخفيف المستجيب CAR والتحكم في الخلايا التائية إلى التركيز المناسب في الأنابيب الفردية ، وقم بإزالة 50 إلى 100 ميكرولتر من كل بئر من اللوحة الإلكترونية بحيث يكون الحجم النهائي في كل بئر 100 ميكرولتر. بعد ذلك ، انظر المستجيب والخلايا التائية الضابطة في الآبار المناسبة بنسب المستجيب إلى الهدف المناسبة في 100 ميكرولتر من الوسط لكل بئر. بعد ذلك ، قم بموازنة اللوحة لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة قبل إعادة اللوحة إلى نظام محلل الخلية.

لقياس فعالية قتل الخلايا التائية بوساطة الخلايا التائية للخلايا السرطانية المستهدفة ، راقب القتل بوساطة الخلايا التائية ذات مستقبلات المستضدات الخيمرية لمدة 96 ساعة.