موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 5:54 دقيقة • July 8th, 2025
خذ صفيحة متعددة الآبار تحتوي على الخلايا الليفية الفئرانية في الوسائط المحرومة من المصل. أضف التخفيفات التسلسلية للأجسام المضادة الخاصة ب TNFα.
أضف TNFα — السيتوكين الالتهابي.
حضن. يحفز الحرمان من المصل الإجهاد الخلوي ، مما يجعل الخلايا عرضة لموت الخلايا المبرمج بوساطة TNFα.
يؤديارتباط TNFα بمستقبلاته على الخلايا المحرومة من المصل إلى شلالات إشارات داخل الخلايا ، مما يؤدي إلى تنشيط سلسلة الكاسباز وتحفيز موت الخلايا المبرمج.
ومع ذلك ، فإن ارتباط الجسم المضاد ب TNFα يمنع ارتباط مستقبلاته ، مما يمنع تنشيط الكاسباز.
بعد الحضانة ، أضف خليط كاشف يحتوي على منظف ، وركيزة كاسباز متلألئة ، وإنزيم لوسيفيراز جنبا إلى جنب مع أيونات ATP والمغنيسيوم. امزج واحتضن.
يتخلل المنظف الأغشية ، ويطلق الكاسباسات من الخلايا التي يسببها TNFα.
تحتويالركيزة المضيئة بيولوجيا على موقع التعرف على الكاسباز. يشق الكاسباسات المحددة الركيزة ، مما ينتج عنه أمينولوسيفيرين.
يؤكسد لوسيفيراز ركيزته ، أمينولوسيفيرين ، مما يؤدي إلى انبعاث الضوء.
قياس شدة التلألؤ للكشف عن انخفاض التلألؤ مع زيادة تركيزات الأجسام المضادة ، مما يشير إلى فاعلية الأجسام المضادة الخاصة ب TNFα لتحييد TNFα ومنع موت الخلايا المبرمج الناجم عن TNFα.
أضف 50 ميكرولترا من تعليق الخلية إلى 60 بئرا داخليا للوحة الفحص ، بدءا من العمود 2 إلى 11. امزج تعليق
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية