تقنية تلطيخ Tetramer الببتيد-MHC-I لتحليل خلايا ذاكرة CD8+ الخاصة ب SIV
موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 4:25 دقيقة • July 8th, 2025
خذ خلايا أحادية النواة أحادية النواة للدم المحيطي من الرئيسيات غير البشرية ، أو PBMCs ، التي تحتوي على خلايا الذاكرة التائية CD8 + ضد فيروس نقص المناعة السيميان أو SIV.
أضف مثبط بروتين كيناز لمنع استيعاب مستقبلات الخلايا التائية ، أو TCR عند التحفيز اللاحق.
إدخال مركب التوافق النسيجي الرئيسي من الفئة الأولى ، أو رباعي معقد التوافق النسيجي الكبير ، أو رباعي التوافق النسيجي الكبير ، والمجمعات المترافقة بالفلوروفور التي تتكون من أربعة جزيئات معقد التوافق النسيجي الكبير المرتبطة بالببتيدات الخاصة ب SIV. ترتبط هذه الببتيدات ب TCRs على سطح الخلايا التائية.
أضف خليطا يحتوي على أجسام مضادة مترافقة بالفلوروفور مرتبطة ب CD8 و CD28 و CCR7 - علامات تحدد مجموعات الذاكرة الفرعية للخلايا التائية - والأجسام المضادة التي تصنف الخلايا غير CD8 +.
صبغة الفلورسنت القابلة للحياة تصنف الخلايا الميتة.
إصلاح الخلايا. تغلغل عليها للوصول إلى الأهداف داخل الخلايا.
أضف الأجسام المضادة المترافقة بالفلوروفور المرتبطة ب CD3 ، وعلامة الخلايا التائية ، و granzyme B داخل الخلايا ، وهي علامة خلية CD8 + T نشطة.
باستخدام قياس التدفق الخلوي ، استبعد الخلايا التائية غير CD8 + والخلايا الميتة.
بوابة pMHC-I الخلايا التائية الإيجابية CD8 + T لتوصيف مجموعات فرعية مختلفة من خلايا الذاكرة CD8 + T بناء على مستويات الجرانزيم B و
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية