اختبار قائم على التدفق الصفحي لدراسة التفاعلات بين الكريات البيض والخلايا البطانية

ابدأ بوضع شريحة زجاجية مع طبقة بطانية أحادية اللحاء محفزة بالسيتوكين ملتصقة في غرفة التدفق.

تعبر هذه الخلايا البطانية عن جزيئات الالتصاق السطحية ، مثل المحددات ، وإشارات الهجرة المرتبطة بالبطانة ، مثل الكيموكينات.

أدخل الكريات البيض ذات العلامات الفلورية إلى غرفة التدفق.

عندما تتدفق الكريات البيض فوق الطبقة الأحادية البطانية ، فإنها تتفاعل مع الخلايا البطانية المنشطة.

ترتبط الاختيارات الموجودة على الخلايا البطانية بالروابط المقابلة لها على الكريات البيض.

تفاعلات Selectin-ligand ضعيفة وعابرة ، مما يمكن الكريات البيض من التدحرج على طول الطبقة الأحادية البطانية تحت قوة وسط متدفق.

يسمح التدحرج للكريات البيض بالتفاعل مع الكيموكينات ، وتنشيط الإنتجرينات وتعزيز توقف الكريات البيض الثابتة.

بعد ذلك ، انتشرت الكريات البيض عبر الطبقة الأحادية البطانية ، مما يدل على قدرتها على الانتقال ، وهي خطوة حاسمة في الاستجابة المناعية.

يساعد هذا الاختبار في دراسة آلية التصاق وإزالة الالتصاق والتهجير للكريات البيض أثناء نقرها فوق الخلايا البطانية.

استخدم ميكرومولار واحدا من صبغة الحمض النووي الفلوري الأخضر المؤثر للخلية لتسمية الكريات البيض بالفلورسنت. بعد وضع العلامات ، احتضن الكريات البيض لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية. ثم ، قم بالطرد المركزي للخلايا عند 300 مرة جم لمدة 5 دقائق لتكسير الخلايا.

أعد تعلي