تحليل العلاقة المستضدية بين الفيروسات باستخدام مقايسة التحييد الدقيق المستندة إلى الصور

أضف الوسائط ومضادات الأمصال المخففة بالإنزيم المدمرة للمستقبلات المخففة بشكل متسلسل على الطبقات الأحادية لخلايا الثدييات ، مما يمنع ارتباط الفيروس غير المحدد.

أضف معلق فيروس الأنفلونزا. الأجسام المضادة للأمصال ، الخاصة بالبروتينات الفيروسية ، ترتبط وتحييد الفيروسات وتمنع دخول الخلايا.

تركيز الأجسام المضادة المنخفض أو الأجسام المضادة غير المعادلة ارتباطا غير فعال بالمستضد الفيروسي ، مما يسمح بارتباط الفيروس بمستقبلات الخلايا.

تجاهل الوسائط. ضع وسائط تحتوي على السليلوز ، لتشكيل تراكب شبه صلب.

يستخدم الفيروس آلية الخلايا المضيفة لتكوين جزيئات فيروسية والتسبب في تحلل الخلايا.

يقيد التراكب حركة الفيروس ، مما يسهل العدوى الموضعية ويخلق ثقوبا في طبقات الخلية الأحادية.

قم بإزالة التراكب. إصلاح الخلايا وتنفذها.

يغسل مع العازلة. أضف الأجسام المضادة المرتبطة بالمستضدات الفيروسية داخل الخلايا المنفذة.

الأجسام المضادة الثانوية المترافقة ببيروكسيداز ماصة الفجل الحار ترتبط بالأجسام المضادة الأولية.

أدخل ركائز البيروكسيداز وبيروكسيد الهيدروجين ، مما ينتج عنه منتج أزرق.

آبار الصورة لتحديد مجموعات الخلايا المصابة بالفيروس مقابل التخفيفات المضادة للمصل.

تحديد التخفيفات المضادة للأمصال التي تشير إلى انخفاض محدد في مجموعة الخلايا المصابة لتحديد عيارات التحييد.

لإجراء تحييد الفيروس ، قم بإعداد طبقة أحادية الخلية قبل يومين أو ثلاثة أيام ، ثم أضف 50 ميكرولترا من VGM إلى كل بئر من اللوحة. استخدم العمودين 11 و 12 للتحكم في الفيروسات والتحكم في الخلايا ، على التوالي. أضف 50 ميكرولتر من مخفف 1 في 20 من الإنزيم المدمر للمستقبلات أو المصل المعالج ب RDE إلى الصف الأول من الأعمدة من 1 إلى 10.

قم بإجراء تخفيفات تسلسلية مزدوجة عن طريق نقل 50 ميكرولتر من الصف A إلى الصف H ، والتخلص من 50 ميكرولتر من الصف H. ثم أضف 50 ميكرولترا من المخفف إلى كل بئر من عمود التحكم في الخلية. أضف 50 ميكرولترا من الفيروس إلى كل بئر من اللوحة باستثناء عمود التحكم في الخلية. احتضان اللوحة عند 37 درجة مئوية لمدة ساعتين إلى ثلاث ساعات. ثم قم بإزالة اللقاح وأضف التراكب إلى كل بئر. احتضان اللوحة طوال الليل عند 37 درجة مئوية دون إزعاج. ثم قم بإصلاح ووصمة عار اللوحات.

لتحديد القياس الكمي ، ضع لوحة بئر في منطقة المسح الضوئي للماسح الضوئي المسطح. امسح اللوحة ضوئيا وقم بتشغيل برنامج قارئ لوحة البئر لحساب العيارات الفيروسية المطلوبة.