القياس الكمي لنشاط عزل البلغم الذاتي السائب في خلايا الثدييات

يتضمن الالتهام الذاتي السائب عزل البضائع الذاتية والبروتينات العصارية الخلوية القابلة للذوبان ، بما في ذلك نازعة هيدروجين اللاكتات أو LDH ، داخل الجسيمات الذاتية للتحلل.

لتقييم عزل LDH ، الذي يعكس نشاط البلع الذاتي السائب ، خذ كوفيت التثقيب الكهربائي مع الخلايا المتعطشة للمغذيات المعالجة بمثبطات لمنع التحلل الذاتي الليزوزومي.

قم بإجراء التثقيب الكهربائي لتعطيل غشاء الخلية بشكل انتقائي وإطلاق البروتينات القابلة للذوبان.

امزج الخلية المعطلة بمحلول السكروز المخزن للحفاظ على المكونات الخلوية.

انقل محلول التعطيل المخفف المطلوب إلى أنبوب يحتوي على مخزن مؤقت. جهاز طرد مركزي لفصل LDH غير المعزول عن LDH المعزول بالبلعمة الذاتية.

انقل المحلول التعطيلي المخفف المتبقي ، الذي يحتوي على جزء LDH الخلوي الكلي ، إلى أنبوب آخر.

أضف عازلة غير أيونية تحتوي على خافض للتوتر السطحي إلى كلا الأنبوبين لاستخراج كسور LDH المعزولة والكلي.

أجهزة الطرد المركزي ونقل المواد الطافية المحتوية على LDH إلى أنابيب تحتوي على عازلة مع البيروفات و NADH.

يحول LDH البيروفات إلى لاكتات مع أكسدة NADH ، مما يقلل من مستويات NADH المرتبطة بتركيز LDH.

تحديد LDH في الكسور الخلوية المترسب والكلية لتحديد عزل LDH.

باستخدام ماصة ، أعد تعليق حبيبات الخلية للحصول على تعليق قريب من خلية واحدة. انقل هذا التعليق إلى كوفيت كهربائي 4 ملم. ض