اختبار تشكيل التركيز لقياس عيار الفيروس في أعضاء الفأر المصاب

خذ صفيحة متعددة الآبار تحتوي على طبقة أحادية من خلايا الثدييات.

تلقيح الآبار بالتخفيفات التسلسلية لمجانسات الأنسجة التي تحتوي على فيروس زيكا المشتق من أعضاء مختلفة من الفأر المصاب.

عند دخوله إلى الخلايا عن طريق الالتقام الخلوي ، يتكاثر الفيروس وينطلق ليصيب الخلايا المجاورة.

تراكب بمحلول ميثيل سلولوز عالي اللزوجة ، مما يخلق حاجزا ماديا يقيد حركة الفيروس.

يسمح الحاجز فقط بإصابة الخلايا المجاورة مباشرة ، وتشكيل بؤر الخلايا المصابة ، ويضمن أن كل تركيز ينشأ من جسيم فيروس واحد ، مما يتيح القياس الكمي بدقة.

إصلاح الخلايا واختراق الغشاء. أضف الأجسام المضادة الأولية التي تدخل الخلايا وتتفاعل مع المستضد الفيروسي.

إدخال جسم مضاد ثانوي مترافق بالبيروكسيداز يرتبط بالجسم المضاد الأساسي.

أضف ركيزة كروموجينيك يتم تحويلها بواسطة البيروكسيديز لإنشاء بقع ملونة ، مما يشير إلى بؤر الخلايا المصابة.

عد البؤر لتحديد عيار الفيروس في أعضاء الفأر المختلفة.

قم بإزالة العينات المتجانسة من الفريزر 80 درجة مئوية تحت الصفر واتركها تذوب. مع وضع العينات على الجليد، قم بتخفيف فيروس زيكا 10 أضعاف في البئر الأول من لوحة التخفيف، واستخدم ماصة متعددة القنوات لإجراء تخفيفات تسلسلية بمقدار 10 أضعاف أسفل اللوحة، وتغيير الأطراف في كل مرة عن طريق إضافة 20 ميكرولترا من العينة إلى 180 ميكرولترا من وسائط النمو.

قم بتغيير أطراف