آثار إجهاد القص على الصفائح الدموية المعالجة بالأجسام المضادة ضد المستقبلات الحسية الميكانيكية

ابدأ بلوحة متعددة الآبار تحتوي على بلازما غنية بالصفائح الدموية. تعبر الصفائح الدموية عن مجمعات المستقبلات الميكانيكية السطحية - تستجيب للمنبهات الميكانيكية.

يحتوي

مركب المستقبلات الميكانيكية على مجال ربط الترابط خارج الخلية ومنطقة الجليكوببتيد الكبيرة المرتبطة بالمجال الحسي الميكانيكي.

إدخال الأجسام المضادة للمستقبلات الميكانيكية ، والربط المتبادل مع مجالات ربط الترابط للمستقبلات على الصفائح الدموية المعارضة.

ضع قطرة من معلق البلازما المعالج بالأجسام المضادة بين تجميعات مقياس اللزوجة.

تطبيق إجهاد القص ، ومحاكاة القوة الميكانيكية ، وسحب المستقبلات المرتبطة بالأجسام المضادة بعيدا عن الصفائح الدموية ، مما يؤدي إلى تفكك منطقة الببتيد الكلي من المجال الحسي الميكانيكي.

يؤدي هذا إلى تغيير توافقي في المجال الحسي الميكانيكي ، مما يؤدي إلى تنشيط الصفائح الدموية ويؤدي إلى التعبير عن علامات السطح.

انقل تعليق الصفائح الدموية المنفصمة إلى بئر جديد داخل اللوحة متعددة الآبار.

أدخل مزيجا من الجزيئات الخاصة بالعلامات التي تحمل علامة الفلوروفور والتي تتفاعل مع علامات سطح الصفائح الدموية المقابلة وقم بإصلاح الخلايا بمحلول تثبيتي.

في قياس التدفق الخلوي ، ترتبط إشارات التألق المميزة بتأثيرات إجهاد القص على الصفائح الدموية المعالجة بالأجسام المضادة.

لعلاج الترابط ، أضف ببطء الجسم المضاد أو الترابط محل الاهتمام إلى البلازما الغنية بالصفائح الدموية ، واخلط الصفائح الدموية برفق. أثناء الحضانة ، قم بتشغيل مقياس اللزوجة المخروطي ، واضبط درجة حرارة اللوحة على 22 درجة مئوية. بعد 5 إلى 10 دقائق ، انقل البلازما المعالجة الغنية بالصفائح الدموية إلى مقياس اللزوجة المخروطي الذي يتم التحكم في درجة حرارته مباشرة في وسط اللوحة ، مع الحرص على ترسيب العينة كلها بين المخروط واللوحة عند نقطة التلامس.

لتطبيق القص على العينة ، احسب القص وفقا لدليل مقياس اللزوجة ، وقم بتطبيق القص على العينة بالمعدل والمدة المناسبين. في نهاية التطبيق، ارفع المخروط على بعد حوالي 2 ملليمتر من اللوحة، بحيث تظل العينة ملامسة لكل من اللوحة والمخروط، واستخدم طرف ماصة تحميل الهلام لتجميع 5 إلى 10 ميكرولتر من مركز حجم العينة. بعد ذلك ، قم باحتضان العينة المنفصمة بأجسام مضادة ضد علامات السطح ذات الأهمية لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة ، وقم بتثبيت العينات في 2٪ بارافورمالدهيد لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.

لتحليل العينات عن طريق قياس التدفق الخلوي ، اجمع ما لا يقل عن 20,000 حدث لكل حالة ، وحدد قوة الإشارة لكل علامة فلورية باستخدام قيمة الارتفاع لشدة كل فلوروفور. بعد ذلك ، استخدم التحكم السلبي مع ألبومين مصل الأبقار أو السيارة لرسم بوابة باستثناء أحداث الفلورسنت السلبية في الخلفية ، وتحديد النسبة المئوية للأحداث داخل البوابة لجميع الظروف التجريبية.