JoVE Encyclopedia of Experiments
علم المناعة
0 مشاهدات • 2:49 د • July 8th, 2025
خذ معلق براز الفأر الذي يتكون من بكتيريا حمض اللاكتيك ، أو LAB ، التي تنتج البكتيريوسين ، وهو ببتيد مضاد للميكروبات ، وتلقيح في وسط أجار ناعم انتقائي LAB تم تسخينه مسبقا.
صب الوسط في طبق أجار ، لتشكيل الطبقة الأولى.
تراكب طبقة أجار ثانية واحتضنها.
تعززالطبقة الأولى بشكل انتقائي نمو المختبر ، مما يسمح لجزيئات البكتيريوسين المفرزة بالانتشار إلى الخارج من المستعمرات إلى الوسط المحيط.
تحتويالطبقة الثانية على وسط خال من الخلايا يسمح بانتشار البكتيريا ويمنع نمو مستعمرات المختبر على السطح.
الآن ، صب طبقة أجار ثالثة تحتوي على سلالة حساسة للبكتيريا.
تواجه البكتيريا التي تنمو في الطبقة الثالثة البكتيريا المنتشرة من الطبقات السفلية.
تعطل البكتيريا غشاء الخلية للبكتيريا الحساسة ، مما يزعج التوازن الخلوي ويؤدي إلى موت الخلايا ، ويمكن رؤيتها كمنطقة واضحة على الطبقة الثالثة.
قم بقياس قطر المنطقة لتقييم فاعلية البكتيريا.
لحساب الخلايا البكتيرية المنتجة للبكتيريا في عينات البراز ، قم بنقل الخلايا المخففة لمنتج البكتيريا إلى 4 ملليلتر من أجار MRS الناعم الدافئ مسبقا. امزج الأجار عن طريق الدوامة ، واسكب الخلايا على لوحة أجار MRS 1.5٪. يشار إلى هذه الطبقة باسم الطبقة الأولى.
انقل 4 ملليلتر أخرى من أجار MRS الناعم الخالي من الخلايا 0.8٪ على الطبقة الأولى لتضمين جميع الخلايا داخل الأجار الناعم. تهدف هذه الطبقة إلى منع الخلايا من النمو كمستعمرات على سطح ألواح الأجار.
في الغطاء المعقم ، جفف الألواح عن طريق إزالة الغطاء لمدة خمس إلى 10 دقائق قبل احتضان الصفائح عند 30 درجة مئوية لمدة 20 إلى 24 ساعة لنمو الخلايا وتكوين المستعمرة.
لتحديد المستعمرات المنتجة للبكتيريا ، امزج 40 ميكرولترا من مزرعة ليلية لسلالة مؤشر مناسبة مع 4 ملليلتر من الأجار الناعم المسخن مسبقا لكل لوحة. صب الخليط على الأطباق. يشار إلى هذه الطبقة باسم الطبقة الثالثة.
جفف واحتضان الصفائح كما كان من قبل ، لنمو الخلايا وتكوين المستعمرة. تحتوي المستعمرات المنتجة للبكتيريوسين على مناطق تثبيط واضحة حول المستعمرات.
تبحث هذه الدراسة في إنتاج البكتيريوسين بواسطة بكتيريا حمض اللاكتيك (LAB) المستخلصة من عينات براز الفئران. تتضمن المنهجية استخدام تقنية طبقات الآجار لتقييم فاعلية البكتيريوسين وتحديد المستعمرات المنتجة له.
يتيح التقييم الكمي لبكتيريا حمض اللاكتيك المنتجة للبكتريوسين من عينات براز الفئران تقييماً في المراحل المبكرة للمرشحات المضادة للميكروبات. يوفر هذا المقايسة باستخدام الآغار الطبقي منصة قابلة للتكرار لفحص نشاط الببتيدات المشتقة من الميكروبات، مما يدعم الثقة التنبؤية في التحقق من الهدف والحد من المخاطر الآلية. ويساهم هذا النهج في فرز المحفظة من خلال تمييز المنتجين الأقوياء للمواد المضادة للميكروبات لإجراء المزيد من الاستقصاءات الانتقالية.
يُدمج هذا المقايسة في السلسلة الممتدة من مرحلة الاكتشاف إلى المرحلة قبل السريرية من خلال تمكين التحديد المبكر والتصنيف الكمي للسلالات المنتجة للبكتريوسين من أجل إجراء المزيد من التوصيف.
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
فيديوهات ذات صلة
0 مرات المشاهدة
آخر تحديث: 29 أغسطس 2026