اختبار الأغشية الحيوية للوحة الوتد لفحص العوامل المضادة للبكتيريا
موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 6:41 دقيقة • July 8th, 2025
خذ صفيحة ميكروتيتر بغطاء يتميز بدعامات أسطوانية أو أوتاد مطلية بأغشية حيوية بكتيرية.
ضع غطاء الوتد المطلي بالأغشية الحيوية على آبار صفيحة ميكروتيتر مع مخزن مؤقت للقضاء على البكتيريا غير المرتبطة أو العوالق ، مع التركيز على القياسات المرتبطة بالأغشية الحيوية.
انقل غطاء الوتد المغطى بالأغشية الحيوية المغسول إلى لوحة تحدي مع زيادة تركيزات العامل المضاد للبكتيريا في الاختبار. احتضان دون اهتزاز.
اعتمادا على تركيز العامل وإمكاناته المضادة للبكتيريا ، فإنه يعطل نشاط التمثيل الغذائي البكتيري وسلامة الأغشية الحيوية.
بعد الحضانة ، ضع غطاء الوتد على آبار صفيحة تحتوي على عازلة لإزالة بكتيريا العوالق.
انقله إلى آبار صفيحة ميكروتيتر مع وسيط استعادة الأغشية الحيوية الذي يحتوي على ريزازورين ، وهو صبغة فلورية ضعيفة نفاذية للخلية. حضن.
في البكتيريا النشطة الأيضية ، تقلل إنزيمات نازعة الهيدروجين من الريزازورين الأزرق اللون إلى ريسوروفين فلوري وردي اللون.
يشيرنقص تحويل الريزازورين إلى استئصال الأغشية الحيوية ، بينما يشير التحويل إلى ريسوروفين إلى وجود خلايا قابلة للحياة.
يشيرأدنى تركيز للعامل المضاد للبكتيريا في الاختبار الذي لا ينتج عنه تحويل ريزازورين إلى الحد الأدنى من تركيز القضاء على الأغشية الحيوية.
خذ طبقا جديدا من 96 بئرا ، وأضف 100 ميكرولتر من CRPMI متوازنا لدرجة حرارة الغرفة إلى كل بئر من
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية