موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 4:34 دقيقة • July 8th, 2025
خذ صفيحة دقيقة تحتوي على خلايا الثدييات على الجليد.
أضف وسيطا يحتوي على الكالسيوم إلى الآبار المختارة ووسطا بدون كالسيوم للآبار الأخرى.
أدخل مونومرات من السم البكتيري المكون. تمنع درجة الحرارة المنخفضة تراكم المونومر ، مما يسهل الارتباط بكوليسترول غشاء الخلية.
احتضان عند درجة حرارة فسيولوجية ، مما يسمح للمونومرات المرتبطة بالكوليسترول بالقلة قليلة وإدخالها في الغشاء ، وتشكيل مسام.
في الآبار التي تحتوي على الكالسيوم خارج الخلية ، تسبب المسام تدفق الكالسيوم.
يؤديالتدفق إلى تساقط السم الخارجي وإعادة إغلاق الغشاء.
تؤدي زيادة الكالسيوم داخل الخلايا أيضا إلى إفراز الخلايا الليزوزومي ، مما يؤدي إلى إطلاق إنزيم يحول سفينغومايلين الغشاء إلى سيراميد.
يؤديالغشاء الغني بالسيراميد إلى الالتقام الخلوي السمي ، مما يعيد إغلاق الغشاء.
يتم إعاقة إعادة إغلاق الغشاء في الآبار التي لا تحتوي على الكالسيوم خارج الخلية.
أضف يوديد البروبيديوم أو PI - صبغة فلورية - لا يمكنها دخول الخلايا بغشاء تم إصلاحه ولكنها تدخل الخلايا التالفة لربط الحمض النووي ، مما ينبعث منها مضانة.
قم بقياس التألق على فترات زمنية محددة لتقييم كفاءة إعادة إغلاق الغشاء.
لإعداد اختبار قائم على التألق عالي الإنتاجية لظروف الإصلاح المسموح بها ، اغسل الخلايا مرتين ب 200 ميكرولتر من 37 درجة مئوية M1 متوسطة لكل بئر ، وأضف 100 ميكرولتر من ا
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية