$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
ابدأ بشريحة تحتوي على أقسام خزعة الشريان الصدغي المثبتة بالفورمالين ومنزوعة البارافينات والمعاد ترطيبها مع الخلايا المناعية المتسللة ، بما في ذلك الخلايا الليمفاوية والضامة.
تعبر البلاعم المنشطة عن مستقبلات حمض الفوليك بيتا أو FR-β — وهي علامة مرتبطة بالمرض ، تميز البلاعم عن الخلايا المناعية الأخرى.
انقل الشريحة إلى مخزن مؤقت مسخن مسبقا لاسترداد المستقبلات السطحية.
عالج القسم ببيروكسيد الهيدروجين ، مما يمنع نشاط البيروكسيديز داخل الخلايا.
أدخل مزيجا من الأجسام المضادة الأولية التي تستهدف CD3 و CD68 و FR-β ، والتي ترتبط بالخلايا المناعية التي تعبر عن هذه البروتينات.
أضف الأجسام المضادة الثانوية البيوتينيل ، والتفاعل مع الأجسام المضادة الأولية ، واغسلها.
تراكب مع الإنزيمات المترافقة بالستربتافيدين التي ترتبط بالبيوتين.
عالج بركيزة كروموجينيك تتفاعل مع الإنزيمات ، وتنتج رواسب بنية موضعية.
أدخل بقعة مضادة — الهيماتوكسيلين ، تلطيخ النوى باللون الأزرق.
تعرف مجهريا الخلايا الصغيرة المستديرة الملطخة باللون البني على أنها خلايا ليمفاوية تعبر عن CD3 وخلايا كبيرة غير منتظمة ملطخة باللون البني مثل البلاعم التي تعبر عن CD68 و FR-β.
حدد كمية البلاعم في القسم للعثور على نسبتها بين إجمالي الخلايا المناعية المتسللة.
لاسترجاع المستضد ، انقل الرف إلى وعاء زجاجي به 200 ميكرولتر من 95 درجة مئوية ، 10 ملليمولار لكل لتر ، عازلة سترات لمدة 30 دقيقة. في نهاية الحضانة ، اترك الشرائح لتبرد إلى درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة قبل شطفها بالماء الجاري لمدة خمس دقائق.
لإزالة نشاط البيروكسيديز الداخلي ، أولا ، استخدم علامة كارهة للماء لرسم دائرة حول كل عينة من الأنسجة ، قبل احتضان العينات في 200 ميكرولتر من بيروكسيد الهيدروجين 3٪ لمدة 10 دقائق ، تليها ثلاث غسلات في 200 ميكرولتر من محلول ملحي مخزن في Tris أو TBSS لكل غسلة. بعد الغسيل الأخير ، ربت على كل شريحة برفق لإزالة أي مخزن مؤقت زائد ، وأضف 200 ميكرولتر من كوكتيل الجسم المضاد الأساسي محل الاهتمام وغطاء لكل شريحة لمدة ساعة واحدة في غرفة رطبة في درجة حرارة الغرفة.
في نهاية الحضانة ، تخلص من أغطية الغطاءة واشطف الشرائح بثلاث غسلات لمدة دقيقتين في TBSS الطازجة. بعد إزالة المخزن المؤقت الزائد ، أضف 200 ميكرولتر من محلول الجسم المضاد الثانوي المناسب للبيوتينيل وغطاء لكل شريحة لمدة 45 دقيقة في الغرفة الرطبة في درجة حرارة الغرفة. بعد التخلص من أغطية الغطاء ، اشطف الشرائح باستخدام TBSS ، كما هو موضح. قم بإزالة أي مخزن مؤقت زائد.
قم بتمكين الأقسام التي تحتوي على 200 ميكرولتر من المخزن المؤقت للركيزة DAB لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. في نهاية الحضانة ، اغسل الشرائح باستخدام TBSS وماء الصنبور الجاري لمدة 10 دقائق ، قبل تلطيخ مضاد باستخدام الهيماتوكسيلين لمدة ثلاث دقائق. بعد ذلك ، أضف 70 ميكرولترا من وسيط التثبيت المناسب لكل شريحة ، وقم بقلب غطاء زجاجي ببطء على وسط التثبيت لتجنب تكوين فقاعات أثناء إنزال الغطاء في مكانه.
للتحليل النسيجي المرضي ، ضع الشريحة على مسرح المجهر الضوئي وقم بتقييم بنية الأوعية الدموية لقسم الأنسجة الأول. بعد ذلك ، حدد عدد البلاعم بالنسبة لعدد الخلايا الليمفاوية لكل قسم.