طريقة تهطيب مناعي متشابكة محسنة للتحديد الفعال للحمض النووي الريبي المرتبط بالبروتين في خصيتي الفئران

خذ خصية الفأر التي تم حصادها حديثا في مخزن مؤقت مبرد. قم بإزالة الغلالة البيضاء ، طبقة الأنسجة الليفية.

ثلاثي الخصية لإطلاق الأنابيب المنوية التي تحتوي على الخلايا الجرثومية وخلايا سيرتولي.

أضف عازلة وأخضع الأنابيب للأشعة فوق البنفسجية من أجل التشابك غير القابل للانقطاع للحمض النووي الريبي مع البروتينات المرتبطة ، مع الحفاظ على التفاعلات.

جهاز الطرد المركزي والتخلص من المادة الطافية.

أعد تعليق الأنابيب في مخزن مؤقت للتحلل يحتوي على مثبطات RNase والبروتياز.

صوتنة الأنسجة ، وإطلاق مجمعات البروتين والحمض النووي الريبي والمكونات الأخرى داخل الخلايا. تعمل مثبطات RNase والبروتياز على تعطيل RNases والبروتياز

الذاتية.

أضف DNase لتحلل الحمض النووي. إدخال RNase المخفف لهضم الحمض النووي الريبي الجزئي.

جهاز الطرد المركزي ونقل المادة الطافية التي تحتوي على مجمعات بروتين الحمض النووي الريبي إلى محلول حبة مغناطيسية مطلي بالأجسام المضادة مع خصوصية عالية للبروتين المستهدف المرتبط بالحمض النووي الريبي.

تطبيق مجال مغناطيسي لفصل مجمعات البروتين والحمض النووي الريبي المرتبطة بالخرزة. تخلص من المادة الطافية.

يغسل مع العازلة. افصل مغناطيسيا بين مجمعات البروتين والحمض النووي الريبي واستخدمها لمزيد من تحليل تفاعل الحمض النووي الريبي والبروتين.

لبدء هذا الإجراء ، احصد حوالي 100 ملليغرام من الخصيتين من الفئر