موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 6:20 دقيقة • July 8th, 2025
خذ خلايا الأعضاء اللمفاوية الثانوية من فأر محصن بالمستضد ، يحتوي على خلايا CD8 + T الخاصة بالمستضد في مراحل دورة الخلية المختلفة.
G1 و S و G2 و M هي مراحل من الخلايا المنقسمة بنشاط ، في حين أن الخلايا في مرحلة G0 هادئة.
أضف صبغة الفلورسنت القابلة للحياة لتسمية الخلايا الميتة ، والأجسام المضادة الموسومة بالفلوروفور ترتبط بعلامات سطح الخلايا التائية CD3 و CD8.
إدخال معددا من الببتيد المستضد المترافق بالفلوروفور - معقد التوافق النسيجي الكبير لربط مستقبلات الخلايا التائية ، ووضع علامات على الخلايا التائية الخاصة بالمستضد.
باستخدام مخزن مؤقت ، قم بإصلاح الخلايا ونفاذها.
أدخل الأجسام المضادة الموسومة بالفلوروفور لربط البروتين النووي المرتبط بتكاثر الخلايا - تلطيخ الخلايا المنقسمة بنشاط.
أضف بقعة فلورية إلى تسمية الحمض النووي.
باستخدام قياس التدفق الخلوي ، حدد الخلايا الحية وحدد خلايا CD8 + T الخاصة بالمستضد عبر الملصقات المرتبطة بالسطح.
تميزشدة صبغة الحمض النووي خلايا G0 و G1 بكمية أقل من الحمض النووي من خلايا S و G2 و M ذات كمية الحمض النووي الأعلى. يؤدي غياب الجسم المضاد الخاص بالبروتين النووي إلى فصل خلايا G0.
قم بإعداد مخزن غسيل نفاذية طازج 1X عن طريق تخفيف عازلة نفاذية 10X بالماء المقطر ، وقم بتصفيته من خلال مرشح 0.45 ميكرومتر للتخلص من الركام. تمييع الجسم المضاد أحادي النسيلة Ki67
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية