قياس امتصاص الخلايا الدبقية الصغيرة لجزيئات الفلورسنت التي يتم تسليمها داخل الجسم الزجاجي باستخدام قياس التدفق الخلوي

0 views • 4:34 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ابدأ بلوحة متعددة الآبار تحتوي على معلق أحادي الخلية للخلايا النخاعية لشبكية الفأر ، بما في ذلك الخلايا الدبقية الصغيرة والخلايا الوحيدة والعدلات.

الخلايا

الدبقية الصغيرة - أو الخلايا المناعية البلعمة الشبكية ، تظهر مضان بسبب الجسيمات الحيوية ذات الأصل الفطري المليء بالفلوروفور ، والتي يتم حقنها مسبقا داخل الجسم الزجاجي.

أجهزة الطرد المركزي وإضافة الأجسام المضادة لمستقبلات FC ، مما يمنع مواقع التفاعل غير المحددة.

قدم مزيجا من الأجسام المضادة المسماة بالفلوروفور التي تستهدف بروتينات السطح CD11b و Ly6C و Ly6G ، وتتفاعل مع الخلايا النخاعية التي تعبر عنها.

إزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة. يعالج بيوديد البروبيديوم ، الذي يتخلل الأغشية التالفة ، ويلطخ الخلايا الميتة حصريا.

في قياس التدفق الخلوي ، قم بإثارة يوديد البروبيديوم لاستبعاد الخلايا الميتة وتحديد الخلايا الحية غير الفلورية.

تضيء الخلايا بالليزر البنفسجي ؛ تدل الخلايا الحية المثارة على الخلايا النخاعية التي تعبر عن CD11b.

بعد ذلك ، أضيء بالليزر الأحمر ، مما يثير الفلوروفور الأحمر القريب داخل الخلايا الإيجابية CD11b ، مما يشير إلى الخلايا الوحيدة التي تعبر عن Ly6C والعدلات التي تعبر عن Ly6G.

إثارة الخلايا بالليزر الأزرق ؛ انبعاث التألق الأخضر من الخلايا الإيجابية CD11b المتبقية يؤكد امتصاص الخلايا الدبقية الصغيرة لجزيئات الفلورسنت.

بعد ثلاث ساعات من الحقن داخل الجسم الزجاجي ، استخدمي ملقطا بزاوية 45 درجة للضغط برفق على الجفن لتحفيز مقلة العين. ضع الملقط خلف مقلة العين ، واسحبه. بعد ذلك ، انقل مقلة العين إلى المنطقة الجافة من طبق بتري الذي يحتوي على كمية صغيرة من PBS مع الكالسيوم والمغنيسيوم تحت مجهر تشريح ، واستخدم طرفا واحدا من الملقط فائق الدقة لثقب العين في طيف القرنية. بعد ذلك ، أمسك مقلة العين بملقط بزاوية 45 درجة ، استخدم مقصا زنبركيا لقطع أطراف القرنية حتى يتم قطع نصف محيط ما يقرب من

انقل مقلة العين إلى PBS واستخدم زوجا ثانيا من الملقط الناعم بزاوية 45 درجة لتمزيق القرنية والصلبة. ستخرج العدسة وشبكية العين سليمة. تأكد من فصل العدسة وشبكية العين وانقل الشبكية إلى أنبوب اختبار البوليسترين سعة 5.4 ملليلتر يحتوي على 2 مل من PBS مع الكالسيوم والمغنيسيوم.

للحصول على تعليق أحادي الخلية لخلايا الشبكية ، استخدم مجموعة تفكك الأنسجة العصبية وفقا لتعليمات الشركة المصنعة وأعد تعليق الخلايا في 200 ميكرولتر من المخزن المؤقت للتلطيخ. ثم انقل العينة إلى بئر واحد من صفيحة قاع على شكل حرف U سعة 96 بئرا. بعد الطرد المركزي ، اقلب اللوحة للتخلص من المادة الطافية ، وقم بسد مستقبلات FC ب 25 ميكرولترا من المخزن المؤقت للبقع الذي يحتوي على الجسم المضاد CD16 / CD32 لكل بئر لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، قم بتسمية الخلايا بالأجسام المضادة ذات الأهمية لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة في الظلام.

بعد ذلك ، قم بتكسير الخلايا واتبع ذلك بغسل 200 ميكرولتر من مخزن التلوين الطازج لكل بئر. الآن ، قم بإعادة تعليق الكريات في 200 ميكرولتر من المخزن المؤقت للبقع وصبغة الجدوى وانقل العينات إلى أنابيب ميكروتيتر سعة 1.2 ملليلتر. بعد ذلك ، اغسل الآبار ب 100 ميكرولتر إضافية من المخزن المؤقت للتلطيخ وصبغة الجدوى وتجمع الغسالات مع العينات المقابلة لتحليلها عن طريق قياس التدفق الخلوي.

10:43

تحليل الخلايا الدبقية الصغيرة والبلاعم المستمدة من الخلايا العصبية من الجهاز العصبي المركزي عن طريق التدفق الخلوي

Related Videos

0 Views

09:58

هضم عيون الماوس كله لتحليل Cytometric تدفق متعدد المعلمة من البلاعات أحادية النوى

Related Videos

0 Views

11:19

الخلايا الدبقية الصغيرة البشرية: التمايز عن الخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات ومقايسة البلعمة في الخلايا الحية في المختبر باستخدام المشبك البشري

Related Videos

0 Views

07:19

تقييم الشبكية دبقية أكلة وظيفة في فيفو باستخدام الفحص القائمة على الخلوي التدفق

Related Videos

0 Views

07:10

القياس الكمي لتعديلات هيستون العالمية بعد الترجمة باستخدام قياس التدفق الخلوي داخل النواة في الخلايا الدبقية الصغيرة لدماغ الفأر المعزول

Related Videos

0 Views

07:41

القياس الكمي للابتلاع الدبقي الصغير للمواد المتشابكة باستخدام قياس التدفق الخلوي

Related Videos

0 Views

Last updated: 4 July 2026