تقييم في الوقت الفعلي للنشاط المضاد للفطريات للخلايا المناعية البشرية الأولية

ابدأ بطبق تصوير زجاجي يحتوي على تعليق من العدلات البشرية - أو الخلايا المناعية وتصورها تحت نظام التصوير الفلوري.

قدم Aspergillus reporter conidia الفلورية المعدلة وراثيا - أو الجراثيم الفطرية ، والتقط الصور على فترات منتظمة تصل إلى 6 ساعات.

تعبر الجراثيم الفطرية عن بروتينات الفلورسنت الحمراء ويتم تصنيفها خارجيا بفلوروفورات أرجوانية غير قابلة للتحلل - مما يساعد على تمييز الخلايا الميتة عن الخلايا الحية.

أثناء الحضانة ، تتفاعل العدلات مع الجزيئات المرتبطة بمسببات الأمراض على الكونيديا من خلال مستقبلات التعرف على الأنماط ، مما يسهل ابتلاعها داخل البلعمة.

في وقت لاحق ، يندمج البلعمة مع الليزوزوم المحتوي على الإنزيم ، مكونا البلعمة.

داخل البلعمة ، تتحلل أنواع الأكسجين التفاعلية والإنزيمات الكونيديا.

أثناء تصوير الخلايا الحية ، في النقطة الزمنية الأولية ، يشير التألق الأحمر والأرجواني المكثف داخل البلعمة للعدلات إلى وجود كونيديا حية.

بمرور الوقت ، يشير انخفاض التألق الأحمر مع الاحتفاظ بالتألق الأرجواني إلى تدهور الكونيديا ، مما يؤكد النشاط المضاد للفطريات للعدلات.

لتصور DsRed و AlexaFlour 633 أثناء الفحص المجهري ، قم بتسخين سخان المجهر مسبقا وقم بتشغيل المجهر والكمبيوتر. بعد ذلك ، أضف 100 ميكرولتر من 3 مرات 10 إلى 6 لكل مليلتر من التعليق المخروطي إلى الآبار المناسبة لطبق التصوير. سجل الو