JoVE Encyclopedia of Experiments
علم المناعة
0 مشاهدات • 2:22 د • July 8th, 2025
ابدأ بطبق تصوير زجاجي يحتوي على تعليق من العدلات البشرية - أو الخلايا المناعية وتصورها تحت نظام التصوير الفلوري.
قدم Aspergillus reporter conidia الفلورية المعدلة وراثيا - أو الجراثيم الفطرية ، والتقط الصور على فترات منتظمة تصل إلى 6 ساعات.
تعبر الجراثيم الفطرية عن بروتينات الفلورسنت الحمراء ويتم تصنيفها خارجيا بفلوروفورات أرجوانية غير قابلة للتحلل - مما يساعد على تمييز الخلايا الميتة عن الخلايا الحية.
أثناء الحضانة ، تتفاعل العدلات مع الجزيئات المرتبطة بمسببات الأمراض على الكونيديا من خلال مستقبلات التعرف على الأنماط ، مما يسهل ابتلاعها داخل البلعمة.
في وقت لاحق ، يندمج البلعمة مع الليزوزوم المحتوي على الإنزيم ، مكونا البلعمة.
داخل البلعمة ، تتحلل أنواع الأكسجين التفاعلية والإنزيمات الكونيديا.
أثناء تصوير الخلايا الحية ، في النقطة الزمنية الأولية ، يشير التألق الأحمر والأرجواني المكثف داخل البلعمة للعدلات إلى وجود كونيديا حية.
بمرور الوقت ، يشير انخفاض التألق الأحمر مع الاحتفاظ بالتألق الأرجواني إلى تدهور الكونيديا ، مما يؤكد النشاط المضاد للفطريات للعدلات.
لتصور DsRed و AlexaFlour 633 أثناء الفحص المجهري ، قم بتسخين سخان المجهر مسبقا وقم بتشغيل المجهر والكمبيوتر. بعد ذلك ، أضف 100 ميكرولتر من 3 مرات 10 إلى 6 لكل مليلتر من التعليق المخروطي إلى الآبار المناسبة لطبق التصوير. سجل الوقت الذي تتم فيه إضافة FLARE conidia.
قم بتركيب طبق التصوير على مرحلة المجهر. بعد ذلك ، في إعدادات الاستحواذ ، اضبط طاقة الليزر على 10٪ ووقت التعرض على ثانية واحدة ، واضبط حساسية الكاميرا للحصول على صورة واضحة ولكن غير مفرطة التعريض ل DsRed و AF 633 ، وقم بإعداد قائمة بنقاط المرحلة. قم بتهيئة التصوير عندما تكون جميع النقاط في التركيز البؤري ، ويتم تحسين قنوات الفلورسنت ، وتعيين وقت الدورة ومدتها.