JoVE Encyclopedia of Experiments
علم المناعة
0 مشاهدات • 3:37 د • July 8th, 2025
ابدأ بطبق أجار يحتوي على المغذيات وضع قطرة من مزرعة ليلية للبكتيريا الأولية المنتجة للمثبطات في المركز.
اترك المزرعة تجف ، مع ضمان الحد الأدنى من انتشار البكتيريا ، واحتضانها.
تشكل البكتيريا الفردية مستعمرات مميزة وتفرز مركبات مضادة للميكروبات - جزيئات مثبطة تنتشر عبر الأجار إلى مسافة معينة.
رش مزرعة مخففة من سلالة بكتيرية منافسة بالتساوي على سطح أجار الذي يحتوي على مستعمرات من البكتيريا الأولية.
أثناء الحضانة ، تتفاعل المركبات المضادة للميكروبات مع البكتيريا المنافسة وتعطل عملياتها الخلوية الأساسية.
ينتج عن هذا موت البكتيريا المنافسة في تلك المنطقة المحددة ، مما يتسبب في انخفاض كبير في نمو البكتيريا.
في المنطقة التي لا تحتوي على مركبات مضادة للميكروبات ، تستخدم البكتيريا المنافسة العناصر الغذائية وتشكل مستعمرات متميزة.
هذا يخلق نمط نمو تفاضلي مع منطقة تثبيط مميزة. تحديد قطر هذه المنطقة ووضوح المنطقة لتقييم تأثير المركبات المضادة للميكروبات المشتقة من البكتيريا.
لتحضير الثقافات البكتيرية بين عشية وضحاها ، قم بربط سلالات المنافس والمثبط على صفيحة أجار BHI معقمة واحتضانها عند 37 درجة مئوية هوائية لمدة 18 ساعة تقريبا. في زجاجة عالمية سعة 28 مليلتر ، قم بتلقيح 10 ملليلتر من مرق BHI المعقم بمستعمرة واحدة من السلالة البكتيرية المنافسة المطلوبة.
احتضان الثقافة في شاكر مداري عالمي عند 37 درجة مئوية و 250 دورة في الدقيقة بين عشية وضحاها. في اليوم التالي ، تأكد من جفاف ألواح الأجار تماما دون تكاثف على الغطاء لمنع التلقيح من الانتشار على اللوحة. ماصة 25 ميكرولترا من المزرعة الليلية على وسط ألواح الأجار، وتجنب الضغط التام على مكبس الماصة لمنع فقاعات الهواء التي ترش المزرعة عبر الأجار.
اترك المزرعة تجف في درجة حرارة الغرفة للحد من انتشار الثقافة. بعد ذلك ، احتضن ألواح الأجار عند 37 درجة مئوية هوائية طوال الليل. بعد زراعة ثقافة بين عشية وضحاها أثناء العمل تحت خزانة أمان من المستوى 2 مبطنة بورق ماص ، استخدم مرق BHI لتخفيف الثقافة عشرة أضعاف لإنتاج ما يقرب من 4 أضعاف 10 إلى سادس CFU لكل مليلتر. ثم اسكب المزرعة المخففة في زجاجة مبخر عطر بلاستيكية معقمة.
لإجراء فحص تثبيط النمو المؤجل ، قم برش المزرعة من خلال كل زجاجة من زجاجات المرذاذ للتأكد من تحميل المزرعة في آلية الرش قبل الرش على الأجار. من مسافة حوالي 15 سم فوق الأجار ، قم برش ما يقرب من 250 ميكرولتر من الثقافة المخففة على سطح الأجار بالكامل. احتضان الصفائح عند 37 درجة مئوية هوائية بين عشية وضحاها.
لتفسير تثبيط النمو المؤجل ، قم بقياس منطقة تثبيط النمو لسلالة المنافس التي تم رشها بالمليمترات ، مع طرح قطر البقعة المركزية للمنتج المثبط. أخيرا ، سجل درجة الوضوح لمناطق التثبيط وفقا لبروتوكول النص.