مقايسة خلوية لتحديد العوامل المتفاعلة مع CXCR4
موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 5:52 دقيقة • July 8th, 2025
خذ صفيحة متعددة الآبار مغلفة بالجيلاتين تحتوي على خلايا سرطان الدماغ البشرية الملتصقة التي تعبر عن CXCR4.
استبدل الوسائط بصبغة حساسة للكالسيوم. تشق الإسترازات داخل الخلايا الصبغة إلى منتج غير منفذ للغشاء يرتبط بأيونات الكالسيوم ، مما يؤدي إلى زيادة الفلورة.
قم بإزالة الصبغة واغسلها وإضافة المخزن المؤقت.
ضع اللوحة في قارئ صفيحة دقيقة مضان مع مركب متفاعل CXCR4 وألواح تحتوي على الكيموكين CXCL12.
باستخدام معلمات آلية محددة ، قم بحقن تركيزات مركبة متزايدة في آبار الاختبار ، متبوعا بتركيز CXCL12 محدد.
في آبار التحكم بدون المركب ، يرتبط CXCL12 ب CXCR4.
ينشط هذا الارتباط سلسلة إشارات ، ويطلق أيونات الكالسيوم في السيتوبلازم ، حيث تربط الصبغة ، مما يؤدي إلى تكثيف التألق.
ومع ذلك ، في آبار الاختبار ، تمنع المركبات المتفاعلة ارتباط CXCL12 ب CXCR4 ، مما يؤثر على تعبئة الكالسيوم ويسبب انخفاضا في التألق المعتمد على الجرعة ، مما يؤكد أنها مضادات CXCR4.
في يوم مرور الخلية ، قم بتغطية كل بئر من صفيحة البوليسترين ذات الجدران السوداء المكونة من 96 بئر بقيعان شفافة مع 100 ميكرولتر من محلول الجيلاتين 0.1٪ ، واحتضان الألواح لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. أثناء تصلب الجيلاتين ، استخدم محلول التربسين-EDTA لرفع الخلايا ذات الأهمية من قاع قارورة الثقافة الخاصة بها ، وإعادة تعليق الخلايا في وسط نمو جديد في
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية