القياس في المختبر لنشاط إنزيم α-Galactosidase A وحمض α-جلوكوزيداز

α-galactosidase A وحمض α-جلوكوزيداز إنزيمات ليزوزومية ضرورية لعملية التمثيل الغذائي الخلوي.

يقوم α-galactosidase A بتكسير ركائز مثل الجليكوليبيدات ، بينما يقوم حمض α-جلوكوزيداز بتحلل الجليكوجين.

لقياس نشاط الإنزيم في المختبر ، خذ آبارا متعددة الآبار مع عينات تحتوي على تركيزات معروفة من α-galactosidase A وحمض α-glucosidase ، على التوالي.

أضف الحجم المطلوب من المحاليل الحمضية من ركائز 4-Methylumbelliferyl الاصطناعية إلى الآبار ، وهي ركائز فلورية محددة مصممة لتقليد الركائز الطبيعية لهذه الإنزيمات.

احتضن في الظلام.

تشق إنزيمات α-galactosidase A وإنزيمات α-glucosidase الحمضية ركائزها الخاصة ، وتطلق منتج الفلورسنت ، 4-methylumbelliferone.

أضف عازلة قلوية لإنهاء التفاعل الأنزيمي.

باستخدام قارئ مضان صفيحة دقيقة ، قم بقياس شدة التألق ل 4-methylumbelliferone في الآبار ، مما يدل على تركيزه ، لتحديد نشاط إنزيم α-galactosidase A وحمض α-glucosidase ، على التوالي.

قم

بتخفيف الكمية المحسوبة لكل عينة وماصتها في أنابيب تفاعل جديدة سعة 1.5 ملليلتر للحصول على 0.05 ميكروغرام من ألفا جالاكتوزيداز أ أو 0.5 ميكروغرام من حمض ألفا جلوكوزيداز لكل ميكرولتر من المحلول. قم بتدوير العينات لمدة 5 ثوان مرة أخرى ، وقم بتقطيع 10 ميكرولترات من هذا التخفيف وتكرارها في صفيحة سعة 96 بئرا.

ابدأ التفاعلات بإضافة 20 ميكرول