الكشف اللوني عن المؤشر الحيوي البكتيري باستخدام اختبار عباد الشمس المعدل

ابدأ ب DNAzyme الذي يشق الحمض النووي الريبي ، وهو DNA تحفيزي يتم تنشيطه عند الارتباط بعلامة حيوية بكتيرية معينة.

يرتبط DNAzyme بحبة مغناطيسية مطلية بالستربتافيدين عبر البيوتين في نهايته 5 بوصات. في نهاية 3 '، يرتبط بأورياز مرتبط بقليل النوكليوتيدات ، ويشكل حبة مغناطيسية وظيفية.

إلى أنبوب يحتوي على حبات مغناطيسية وظيفية ، أضف بكتريا قولونية محللة.

علامة حيوية محددة للإشريكية القولونية من المحللة ، تنشط DNAzyme ، مما يؤدي إلى انقسام ارتباط الحمض النووي الريبي ، مما يتسبب في انفصال DNAzyme-urease المترافق.

استخدم حاملا مغناطيسيا لتثبيت الخرزات وإزالة اقتران DNAzyme-urease المرتبط بالخرز.

انقل المادة الطافية المحتوية على اليورياز إلى أنبوب آخر.

أضف صبغة مؤشر الأس الهيدروجيني - أحمر الفينول ومحلول اليوريا.

يحلل اليورياز اليوريا إلى الأمونيا وثاني أكسيد الكربون.

الأمونيا ، وهي قاعدة ضعيفة ، ترفع درجة الحموضة في المحلول ، مما يتسبب في تغيير اللون ، مما يشير إلى وجود العلامة الحيوية للإشريكية القولونية.

بعد تحضير بكتريا قولونية الخلايا وفقا لبروتوكول النص ، اغسل مسبقا أنبوب ميكرو بسعة 1.5 ملليلتر عن طريق إضافة 100 ميكرولتر من RB وتدويرها. ثم تجاهل المخزن المؤقت.

أضف 15 ميكرولترا من EC1 المجمعة إلى الأنبوب المغسول ، ثم ضع الأنبوب على الرف المغناطيسي ، وشفط المادة الطافية. قم بإزالة الأنبوب من الرف ، وأضف 100 ميكرولتر من RB ، وأعد تعليق الخرز المغناطيسي بعناية.

بعد استخدام RB لغسل الخرزات مرتين أخريين وإزالة RB ، أضف 10 ميكرولترات من عينة الإشريكية القولونية إلى الأنبوب ، واخلط المحتويات برفق عن طريق النقر على الأنبوب. ثم احتضان التفاعل في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة واحدة.

بعد الحضانة ، أضف 90 ميكرولترا من الماء المقطر بشكل مزدوج ، وضع الأنبوب على الرف المغناطيسي. بعد ما يقرب من ثلاث دقائق من الفصل المغناطيسي ، انقل بعناية 85 ميكرولترا من المادة الطافية إلى أنبوب ميكرو فوج سعة 0.5 ملليلتر.

من المهم جدا ماصة المحلول بعناية دون تناول أي من الخرزات المغناطيسية. هذه الخرزات محملة باليورياز وستولد إشارة إيجابية خاطئة.

أضف 15 ميكرولترا من 0.04٪ فينول أحمر و 100 ميكرولتر من محلول الركيزة. بعد ذلك ، التقط صورا فوتوغرافية على فترات زمنية محددة لتسجيل تغيير اللون.