الفحص المجهري الكمي بفاصل زمني لتقييم انتشار البكتيريا المعتمد على صلابة المصفوفة خارج الخلية

خذ صفيحة متعددة الآبار مع طبقات أحادية للخلايا البطانية البشرية الملتصقة على هيدروجيل بولي أكريلاميد مطلي بالكولاجين ذو صلابة متفاوتة.

تخضع

الخلايا الموجودة على الهلاميات المائية الأكثر صلابة لإعادة تنظيم الهيكل الخلوي بشكل كبير ، مما يزيد من التوتر داخل الخلايا ، مقارنة بالهلاميات المائية الأكثر ليونة.

اغسل الخلايا بالوسائط وأضف Listeria monocytogenes المهندسة - التي تعبر عن بروتين فلوري تحت محفز البروتين المحفز لتجميع الأكتين (ActA).

أجهزة الطرد المركزي لتسهيل الاتصال بين الخلايا والبكتيريا. احتضان للتوسط في الالتقام الخلوي البكتيري.

يغسل بالوسائط. يعالج بالجنتاميسين للقضاء على البكتيريا غير الداخلية. حضن.

تطلق البكتيريا الداخلية السموم المكونة للمسام ، مما يؤدي إلى تعطيل الأغشية البلعمة. تعمل البكتيريا العصارية الخلوية على تنظيم ActA وتعبير البروتين الفلوري ، وتصنيف البكتيريا داخل الخلايا.

تحفز بروتينات ActA بلمرة الأكتين ، وتشكل ذيل مذنب الأكتين الذي يدفع البكتيريا إلى الأمام ، مما يتسبب في استيعاب الخلايا المجاورة ، وتعزيز الانتشار.

بعد الحضانة ، استخدم الوسائط المحتوية على الصبغة لتلطيخ نوى الخلايا. استبدل الوسائط بوسائط تحتوي على الجنتاميسين.

إجراء الفحص المجهري بفاصل زمني.

تعمل الهلاميات المائية اللينة على تعزيز الانتشار السريع للبكتيريا بين الخلايا مقارنة بالهيدروجيلات الأ