مقايسة التخفيف الدقيق للمرق في المختبر لفحص المركبات المضادة للفطريات

خذ صفيحة ميكروتيتر، وأضف التخفيفات التسلسلية للببتيدات الجديدة المضادة للميكروبات أو AMPs — مركبات الاختبار.

قم بتعيين مجموعة فرعية من الآبار كعناصر تحكم في النمو ، وأضف المياه المعقمة بدون AMPs.

أضف فطرا مسببا للأمراض معلقا في وسط النمو في آبار مختارة.

أضف فقط الوسائط الخالية من الفطريات في مجموعة فرعية من الآبار المصنفة كعناصر تحكم فارغة.

أغلق اللوحة واحتضانها في ظل ظروف رطبة مواتية لنمو الفطريات.

بعد الحضانة ، راقب الآبار تحت المجهر.

تبدو ضوابط النمو عكرة بسبب نمو الفطريات في غياب AMPs. تشير التعكر عبر جميع تخفيفات AMP إلى عدم فعاليته ضد الفطريات.

تبدو الضوابط الفارغة ، الخالية من نمو الفطريات ، واضحة. قارن آبار الاختبار مع أدوات التحكم الفارغة لتأكيد عدم وجود نمو ، مما يشير إلى النشاط المضاد للفطريات ل AMPs.

يطلق

على أقل تركيز ل AMP الذي يمنع نمو الفطريات الحد الأدنى من التركيز المثبط ، أو MIC.

يتم إجراء الفحص المضاد للفطريات في ثلاث نسخ في ألواح دقيقة من البوليسترين 96 بئرا باستخدام تخفيف تسلسلي 2 أضعاف لكل ببتيد ومضاد للفطريات وحجم نهائي يبلغ 50 ميكرولتر لكل بئر.

الخطوة الأكثر أهمية في البروتوكول هي التخفيفات التسلسلية. لذا كن حذرا جدا خلال الخطوات القليلة التالية لتجنب أي خطأ من شأنه أن يضر بتحليلك بالكامل.

باستخدام ماصة ، أضف 100 ميكرولتر من الببتيد المضاد للفطريات في تركيز