تحديد دور الخلايا الشبيهة بالعدلات في حساسية خلايا سرطان الغدد الليمفاوية لدواء الاختبار

خذ صفيحة متعددة الآبار تحتوي على زراعة كروية ثلاثية الأبعاد لخلايا سرطان الغدد الليمفاوية ، وخلايا الدم البيضاء السرطانية ، والثقافات المشتركة لسرطان الغدد الليمفاوية والخلايا الشبيهة بالعدلات في مصفوفة غشاء القاعد.

أضف دواء اختبارا يرتبط بالتوبولين داخل الخلايا ويعطل بلمرة الأنابيب الدقيقة ، مما يؤدي إلى موت الخلايا المبرمج الخلوي.

في الزراعة المشتركة ، ينشط التلامس المباشر لخلايا سرطان الغدد الليمفاوية الخلايا الشبيهة بالعدلات ، مما يؤدي إلى إفراز السيتوكين.

تتفاعل هذه السيتوكينات مع مستقبلات خلايا سرطان الغدد الليمفاوية ، مما يؤدي إلى شلالات إشارات المصب وتنظيم التعبير عن البروتين المضاد للموت المبرمج ، مما يعزز بقاء الخلية.

تجاهل الوسائط. أضف المخزن المؤقت للتفكك لتعطيل الالتصاق الخلوي.

اكشط الكرات واحتضانها تحت التحريض. انقل التعليق إلى الأنابيب واستمر في التحريك لتشكيل معلقات أحادية الخلية.

تقديم كوكتيل الأجسام المضادة المترافقة بالفلوروفور الذي يصنف سرطان الغدد الليمفاوية والخلايا الشبيهة بالعدلات.

أضف الملحق V الموسوم بالفلوروفور ويوديد البروبيديوم لتسمية الخلايا المبرمج والخلايا الميتة.

باستخدام قياس التدفق الخلوي ، اكتشف زيادة بقاء خلايا سرطان الغدد الليمفاوية في الزراعة المشتركة ، مما يشير إلى الحماية بوساطة العدلات ضد الدواء.

لإنشاء ثقافة مشتركة ثلاثية الأبعاد ، أضف 50,000 خلايا سرطان الغدد الليمفاوية RL B وحدها ، أو امزجها مع الخلايا المتمايزة HL60 في أنابيب معقمة سعة 15 ملليلترا.

قم بتدوير العينات وإعادة تعليق الكريات في 300 ميكرولتر من مصفوفة الغشاء القاعدي باستخدام طرف ماصة سعة 1 مليلتر مع قطع الفتحة إلى 2 إلى 3 ملليمترات. بعد ذلك ، احتضان 300 ميكرولتر من الخلايا في كل بئر من صفيحة 24 بئرا لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون.

في نهاية الحضانة ، أضف 1 مليلتر من وسط RPMI الكامل إلى كل بئر ، وعد إلى الثقافات ثلاثية الأبعاد إلى الحاضنة لمدة سبعة أيام أخرى مع تغييرات متوسطة كل يومين. في اليوم 5 ، أضف 10 نانومولار فينكريستين إلى الثقافات.

بعد أسبوع واحد من الثقافة ، استنشق الوسط واغسل كل بئر مرتين مع 1 مليلتر من PBS المثلج. بعد ذلك ، أضف 3 ملليلتر من PBS المثلج مع EDTA إلى كل بئر ، واكشط قاع الآبار بطرف ماصة سعة 200 ميكرولتر لفصل المواد الهلامية. رج الطبق برفق على الثلج لمدة 30 دقيقة. بعد ذلك ، انقل معلقات الخلية إلى أنابيب فردية معقمة سعة 15 مليلتر للرج اللطيف على الجليد لمدة 30 دقيقة أخرى.

تأكيد ظهور تعليق الخلية المتجانسة. بعد ذلك ، قم بتدوير الخلايا ، متبوعا بغسل PBS ، وأعد تعليق الكريات في PBS الطازج باستخدام FBS. أخيرا ، قم بتسمية الخلايا بالأجسام المضادة المناسبة وأصباغ البقاء كما هو موضح للتو ، وقم بتحليل الخلايا المتمايزة RL و HL60 عن طريق قياس التدفق الخلوي باستخدام استراتيجية البوابات الموضحة.