اختبار لتقييم الهيمنة المناعية في استجابات الخلايا الليمفاوية التائية السامة للخلايا

ابدأ بالخلايا المستهدفة المسماة بصبغة الفلورسنت التي تقدم حاتمة ببتيد غير تفاعلية أو حواتم ببتيد مشتقة من مستضد الورم مع مناعة متفاوتة.

تظهر هذه الخلايا شدة مضان متفاوتة - منخفضة ومتوسطة وعالية - تتوافق مع عرض حواتم الببتيد غير التفاعلية والثانوية والمسيطرة على المناعة ، على التوالي.

قم بتطبيق تعليق الخلية عن طريق الوريد إلى فأر حساس.

تنتقل الخلايا المحقونة إلى الطحال الذي يحتوي على مجموعات الخلايا المناعية ، بما في ذلك الخلايا الليمفاوية التائية السامة للخلايا أو CTLs.

داخل الطحال ، تتفاعل CTLs مع حواتم الخلايا المستهدفة.

تؤدي الحلقات المناعية ، كونها أكثر مناعة ، إلى استجابة مناعية قوية ل CTL ، وتطلق مواد سامة للخلايا وتؤدي إلى تحلل الخلايا الفلورية عالية الكثافة.

اجمع طحال الفأر وقم بتعطيله ميكانيكيا. أضف عازلة التحلل للتخلص من خلايا الدم الحمراء وتصفية المعلق.

جهاز طرد مركزي وإعادة تعليق بيليه الخلية.

قم بفرز الخلايا باستخدام فارز الخلايا المنشط بالفلورة. يؤكد الانخفاض في الخلايا الفلورية عالية الكثافة ، مقارنة بالخلايا الفلورية المتوسطة ومنخفضة الكثافة ، الهيمنة المناعية في استجابة الخلايا الليمفاوية التائية السامة للخلايا.

لحقن الخلايا المستهدفة ، أولا ، قم بدوامة أنابيب المصدر برفق وقم بتجميع معلقات الخلايا الثلاثة المسماة CFSE في أنبوب جديد بنسب متساوية. قم بتعبئة محتويات ا