موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 2:46 دقيقة • July 8th, 2025
خذ صفيحة متعددة الآبار مع مزرعة الخلايا الجذعية الوسيطة الملتصقة ، أو MSC.
أضف خلايا الدم المحيطية أحادية النواة ، أو PBMCs ، واحتضنها.
تفرز الخلايا الجذعية الجذعية عامل نمو الخلايا الكبدية ، مما يحفز الخلايا الوحيدة على اكتساب نمط ظاهري معدل للمناعة ، وإنتاج إنترلوكين -10 ، أو IL-10.
انقل المادة الطافية المحتوية على PBMC إلى أنبوب.
أضف حبات مغناطيسية مطلية بالأجسام المضادة ملتصقة بعلامة سطح الخلية الأحادية CD14.
استخدم فاصلا مغناطيسيا لعزل الخلايا الوحيدة CD14 + ، وإضافتها إلى آبار الصفائح متعددة الآبار بتركيزات متزايدة.
إدخال صبغةالفلورسنت المستجيب CD4 + T المسمى CFSE.
أضف الميكروبيدات المترافقة بالأجسام المضادة المرتبطة على وجه التحديد بعلامات سطح الخلية التائية CD3 و CD28 ، مما يؤدي إلى تنشيط الخلايا.
في السيطرة على الخلايا الوحيدة التي تفتقر إليها جيدا ، تتكاثر الخلايا التائية المنشطة ، مع كل انقسام خلوي يقلل من شدة مضان CFSE في الخلايا الوليدة.
ومع ذلك ، في الثقافات المشتركة ، تفرز الخلايا الوحيدة التي يسببها MSC IL-10 ، مما يثبط تكاثر الخلايا التائية المستجيب.
باستخدام قياس التدفق الخلوي ، لاحظ عددا أقل من الخلايا التائية التي تظهر شدة مضان منخفضة في CFSE مع زيادة تركيزات الخلايا الوحيدة ، مما يشير إلى قمع تكاثر الخلايا التائية المستجيبة بواسطة الخلايا الوحيدة التي يسببها MSC.
لإجراء مقايسة قمع المستجيب، ابدأ بإعداد استزراع مشترك ل MSC-PBMC مع 2.5 × 106 PBMCs، مزروعة مشتركة مع 250,000 MSCs لضمان ما يكفي من PBMCs المزروعة المشتركة ل MSC لاختيار السكان الفرعيين.
بعد 48 إلى 72 ساعة عند 37 درجة مئوية ، حدد الكريات البيض المعدلة للمناعة التي يسببها MSC ذات الأهمية مع الخرز المغناطيسي المناسب. بعد ذلك ، أضف الخلايا التائية الخيفية الإيجابية CD4 المسماة CFSE في 1 مليلتر من وسط الكريات البيض الكامل لكل بئر ، بنسب تجريبية مختلفة.
بعد ذلك ، أضف الميكروبيدات المترافقة المضادة ل CD3 / 28 بنسبة 1 إلى 1 حبة إلى خلية لتحفيز الخلايا التائية الإيجابية CD4. في اليوم الثالث من الزراعة المشتركة ، قم بتقييم تكاثر الخلايا التائية الإيجابية CD4 المسماة CFSE عن طريق قياس التدفق الخلوي.