القياس الكمي القائم على قياس التدفق الخلوي للخلايا السرطانية الشائخة التي يسببها العلاج

خذ الخلايا السرطانية المعالجة مسبقا بدواء العلاج الكيميائي الذي يحفز الشيخوخة في نسبة مئوية من الخلايا.

تتراكم هذه الخلايا حبيبات ليبوفوسين ذاتية الفلورسنت ، وهي علامة شيخوخة معروفة.

أضف مضادا حيويا يدخل الخلايا ويمنع مضخات البروتون الليزوزومي ، مما يمنع تحمض الليزوزومي.

تؤدي الزيادة في درجة الحموضة إلى تعطيل الإنزيمات الليزوزومية.

تفرط الخلايا الشائخة في التعبير عن β-galactosidase الليزوزومي حتى عند درجة الحموضة شبه المحايدة ، مما يجعلها مؤشرا حيويا للشيخوخة.

أدخل ركيزة β-galactosidase. حضن.

يقوم

β-galactosidase بتحلل الركيزة الداخلية إلى منتج فلوري ، مع تسمية الخلايا الشائخة.

جهاز الطرد المركزي والتخلص من المادة الطافية.

أضف صبغة صلاحية الخلية. داخل الخلايا الحية ، تقوم الإستراز النشط بتحويل الصبغة إلى منتج فلوري غير منفذ للغشاء. تظل الخلايا الميتة ذات سلامة الغشاء المعرضة للخطر غير ملطخة.

باستخدام قياس التدفق الخلوي ، اكتشف الخلايا القابلة للحياة التي تعرض العلامات المزدوجة ليبوفوسين والركيزة الفلورية β-galactosidase ، مما يشير إلى الخلايا الشائخة.

تحديد النسبة المئوية للخلايا السائدة لإثبات فعالية الدواء.

أولا ، اضبط درجة الحموضة الليزوزومية لعينات الخلايا المستزرعة عن طريق إضافة محلول واحد من البابيلومايسين A الميكرومولار في DMEM إلى حبيبات الخلية بتركيز واحد في 10 إلى الخلايا