موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 2:50 دقيقة • July 8th, 2025
خذ صفيحة متعددة الآبار تحتوي على البكتيريا المعوية المسببة للأمراض في وسط النمو.
يحتوي الوسط الموجود في الآبار المختارة على أملاح صفراوية - أو جزيئات برمائية ذات نشاط يشبه المنظفات - تحاكي ظروف النمو القاسية.
تعطل أملاح الصفراء الغشاء البكتيري وتسبب تلفا للحمض النووي والبروتينات.
كآلية مضادة ، تشكل البكتيريا غشاء حيوي - مجتمع بكتيري منظم مغلف بمصفوفة منتجة ذاتيا من المواد البوليمرية خارج الخلية ، أو EPS ، تحتوي على السكريات والبروتينات والدهون والأحماض النووية ذات الأصل الميكروبي.
تحمي طبقة EPS البكتيريا من التعرض للأملاح الصفراوية.
بعد الحضانة ، استنشق الوسائط لإزالة البكتيريا العائمة بحرية.
عالج بمخزن مؤقت للتثبيت للحفاظ على بنية الأغشية الحيوية ، واغسلها لإزالة المخزن المؤقت الزائد.
أضف Concanavalin A المسمى بالفلورسنت - وهو ليكتين يرتبط بالسكريات EPS ، مما يضع علامة على الأغشية الحيوية. يغسل لإزالة الكونكانافالين الزائد أ.
باستخدام قارئ لوحة ، قم بقياس التألق. تشير شدة التألق الأعلى في الآبار المحتوية على ملح الصفراء إلى تكوين الأغشية الحيوية الناجم عن الملح الصفروي.
للكشف شبه الكمي عن EPS، استخدم ماصة متعددة القنوات لنقل وسط الاستزراع إلى صفيحة شفافة سعة 96 بئرا. بعد ذلك ، استخدم 200 ميكرولتر من كاشف التثبيت لإصلاح اللوحة السوداء لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. الآن ، قم ب
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية