طريقة لتحضير العينة لتصور البكتيريا المكونة للأغشية الحيوية على الخيوط الفطرية

أدخل مستعمرة فطرية مرتبطة بالسيلوفان في معلق بكتيري يحمل علامة الفلورسنت. قم بإزالة السيلوفان واحتضانه.

تلتصق الخلايا البكتيرية بالسطح الفطري عبر الجزيئات السطحية والمستقبلات. تفرز البكتيريا الملتصقة مواد بوليمرية خارج الخلية تتكون من السكريات والبروتينات والحمض النووي ، مما يحبس الخلايا البكتيرية ويشكل الأساس الهيكلي للأغشية الحيوية.

اشطف القسم بمحلول ملحي قوي لإزالة البكتيريا غير المرتبطة

في عازلة الفوسفات ، قم بقطع جزء من المستعمرة.

انقل القسم إلى ماء معقم يحتوي على جنين القمح agglutinin ، أو WGA المرتبط بصبغة فلورية حمراء.

يرتبط WGA ، وهو بروتين نباتي ، ببقايا N-acetylglucosamine وحمض السياليك ، مما يسمح للصبغة المرفقة بالتألق على جدار الخلية الفطرية.

شطف القسم في مخزن مؤقت الفوسفات.

اغمر شريحة جزئيا في المخزن المؤقت. دع القسم يطفو عليه. ارفعها برفق حتى يستقر القسم دون انقطاع الأغشية الحيوية.

ضع وسيطا متصاعدا ، متبوعا بغطاء للتحليل المجهري.

بعد زراعة البكتيريا بين عشية وضحاها ، قم بالطرد المركزي للثقافة عند 5,000 مرة جم لمدة ثلاث دقائق ، ثم قم بتعليق الحبيبات في 25 مل من محلول فوسفات البوتاسيوم المعقم 0.1 مولار. بعد تكرار الطرد المركزي ، استخدم نفس المخزن المؤقت لضبط التركيز البكتيري النهائي إلى 10 إلى الخلايا التاسعة لكل مليلتر.

املأ صفيحة دقيقة مكونة من 6 آبار ب 5 مل من المعل