تحليل في الوقت الفعلي لهجرة الخلايا التائية المقيمة في مناطق الورم المختلفة باستخدام الفحص المجهري متحد البؤر

ابدأ بشريحة ورم الرئة تحتوي على الخلايا التائية المقيمة.

تهاجر الخلايا التائية عبر البيئة المكروية للورم وتتفاعل مع الخلايا السرطانية والعناصر اللحمية ، وتؤدي وظائف المناعة.

يؤثر

تكوين البيئة المكروية للورم بشدة على إزاحة الخلايا التائية وسرعتها.

أضف أجساما مضادة متميزة مقترنة بالفلورسنت لتسمية الخلايا التائية والخلايا السرطانية والعناصر اللحمية في البيئة المكروية.

أضف DAPI ، الذي يتسلل إلى الخلايا بغشاء بلازما تالف لتلطيخ النواة ، مما يتيح تصور المناطق النخرية داخل الورم.

راقب العينة الملطخة تحت المجهر متحد البؤر.

باستخدام ضوء مضان مناسب ، حدد منطقة الورم ذات الأهمية التي تحتوي على الخلايا التائية المقيمة. تقييم صلاحية الخلية من خلال تقييم الخلايا الإيجابية ل DAPI.

للتحليل في الوقت الفعلي ، حدد الفواصل الزمنية وإجمالي وقت التسجيل.

لالتقاط صور z-stack ، ابدأ بعمق أسفل الخلايا التائية المسماة والتقط الصور على فترات زمنية مختلفة.

استخدم برنامج التتبع لمقارنة طول إزاحة الخلايا التائية ومتوسط السرعة في مناطق الورم المختلفة.

قم

بتخفيف الأجسام المضادة المطلوبة المسماة بالفلورسنت والصبغة النووية الفلورية ، DAPI ، إلى التركيزات النهائية المطلوبة في وسط RPMI الخالي من الفينول الأحمر. بعد ذلك ، قم بإزالة لوحة الثقافة من الحاضنة وباستخدام طرف ناعم ، قم بشفط السائل داخل غسالات الفولاذ المقاوم