موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 4:11 دقيقة • July 8th, 2025
خذ مزرعة خلايا الثدييات التي تعبر عن مجال تكرار بروتين تاو المرتبط بالأنابيب الدقيقة.
يمتلك مراسلو تاو السيتوبلازميون طفرة معرضة للتجميع ويتواجدون كمونومرات.
يتم دمج المراسلين إما في الفلوروفور A أو B ، مع تداخل طيف الانبعاث الأول مع طيف امتصاص الأخير.
أضف الجسيمات الشحمية المعقدة ببذور تاو أو الركام الليفي من تاو كامل الطول.
عند دخول الخلية ، يطلق الجسيم الشحمي البذور في السيتوبلازم.
تتوسط البذور التي تم إطلاقها في تجميع مراسلي تاو ، مما يجعل الفلوروفور A بالقرب من الفلوروفور B.
أضف التربسين لفصل الخلايا ، ثم قم بإجراء التثبيت.
تحليل الخلايا باستخدام مقياس التدفق الخلوي.
نظرا للقرب داخل الركام ، عند الإثارة ، يشار إلى نقل الطاقة من الفلوروفور A إلى B عبر تفاعل ثنائي القطب ثنائي القطب باسم نقل طاقة الرنين الفلوري أو FRET.
يصدر الفلوروفور B المتحمس إشارة FRET ، يشير وجودها إلى تراكم البروتين.
لإعادة طلاء خلايا المستشعر الحيوي في ظل ظروف معقمة ، اشطف كل خط خلية باستخدام PBS دافئ متبوعا بحضانة لمدة 3 دقائق باستخدام Trypsin-EDTA. عندما تنفصل الخلايا ، أوقف التفاعل بوسط الثقافة الدافئة ، وانقل الخلايا على الفور إلى أنبوب مخروطي الشكل.
الطرد المركزي للخلايا ، وإعادة تعليق الحبيبات في وسط جديد. بعد ذلك ، قم بحساب الخلايا وقم بعمل تخفيف خلية Mastermix من 3،500،000 خلية لكل 13 مل من الوسط.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية