قياس تنشيط وظائف المستجيب بوساطة FC بواسطة الأجسام المضادة ل HA
موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 3:03 دقيقة • July 8th, 2025
خذ التخفيفات التسلسلية لجسم مضاد يستهدف فيروس الإنفلونزا هيماجلوتينين ، أو HA ، وهو بروتين سكري يتكون من رأس كروي وساق.
أضف التخفيفات إلى خلايا الثدييات المنقولة التي تعبر عن حمض الهيالورونيك المرتبط بالسطح. ترتبط الأجسام المضادة بمناطق ساق HA ، وتشكل مجمعات مناعية.
إدخال الخلايا التائية المهندسة التي تعبر عن مستقبلات Fc وترميز مراسل لوسيفيراز تحت سيطرة عامل النسخ NFAT.
أثناء الحضانة ، يرتبط الجسم المضاد المرتبط ب HA بمستقبل Fc ، بينما يرتبط رأس HA بحمض السياليك ، مما يؤدي إلى تنشيط الخلايا التائية وزيادة تركيز الكالسيوم العصاري الخلوي.
يبدأهذا التنشيط سلسلة إشارات تؤدي إلى إزالة الفسفرة من NFAT ، مما يؤدي إلى انتقالها النووي.
يرتبط NFAT بعناصر استجابته في الجينوم ، مما يؤدي إلى تعبير لوسيفيراز.
أضف ركيزة مضيئة حيوية منفذة للخلية. يؤكسد لوسيفيراز الركيزة ، مما ينتج عنه إشارة.
يؤكدانخفاض اللمعان مع انخفاض تركيز الأجسام المضادة تنشيط الخلايا التائية بوساطة الأجسام المضادة الخاصة بساق HA.
لتقييم قدرة الأجسام المضادة المحددة ذات الأهمية على استهداف الخلايا التي تعبر عن الهيماجلوتينين ، استبدل المادة الطافية لمزارع الخلايا المصابة فيروسا ب 25 ميكرولترا من السمية الخلوية المعتمدة على الأجسام المضادة ، أو ADCC ، وسط الفحص.
بعد ذلك ، في صفيحة منفصلة مكونة من 96 بئرا ، قم بإجراء تخفيفات ب
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية