JoVE Encyclopedia of Experiments
علم المناعة
0 مشاهدات • 2:10 د • July 8th, 2025
قم بإعداد مزيج تعداء عن طريق إضافة بوليمر كاتيوني مناسب وناقلات البلازميد المنفصلة لجينات الأجسام المضادة ثقيلة السلسلة والسلسلة الخفيفة.
يرتبط البوليمر موجب الشحنة بالبلازميدات سالبة الشحنة ، ويشكل مجمعات.
أضف مزيج التعداء هذا إلى صفيحة متعددة الآبار تحتوي على ثقافة خلايا الكلى الجنينية البشرية في وسط خال من المصل واحتضنها.
تدخل المجمعات إلى الخلايا من خلال الالتقام الخلوي ، مما يتسبب في تورم وتمزق داخلي ، وإطلاقها في السيتوبلازم.
ينتج البوليمر الكاتيوني مساما في الغشاء النووي ، مما يسهل دخول النواقل ويتيح نسخها ، يليها الترجمة إلى بروتينات ثقيلة وخفيفة السلسلة.
تنتقل هذه البروتينات إلى الشبكة الإندوبلازمية ، حيث يتم تعتيم البروتينات ذات السلسلة الثقيلة والخفيفة وربطها تساهميا بواسطة روابط ثاني كبريتيد ، وتشكل أجساما مضادة.
تنتقل الأجسام المضادة إلى جهاز جولجي لإجراء تعديلات إضافية بعد الترجمة ويتم تعبئتها في حويصلات لإطلاقها خارج الخلية.
اجمع الوسط الذي يحتوي على الأجسام المضادة المنطلقة. أضف وسيطا خاليا من المصل لاستمرار توليد الأجسام المضادة.
قم بإعداد خلايا HEK في DMEM المكمل وقم بزراعتها إلى 75٪ من التقاء في قوارير استزراع 75 سنتيمترا مربعا. لكل تعداء سلسلة ثقيلة / خفيفة ، قم بإعداد مزيج مع 1.75 مل من DMEM بدون مصل. تشمل 4.5 ميكروغرام من ناقل السلسلة الثقيلة ، و 3 ميكروغرام من ناقل السلسلة الخفيفة ، و 50 ميكرولتر من محلول بولي إيثيلينيميني. أضف هذا الخليط برفق إلى طبق من خلايا HEK وقم بتدوير المحلول فوق الطبق.
احتضن الطبق طوال الليل ، ثم ابدأ في جمع وسائط الثقافة كل يوم ، واستبدلها بوسيط بدون مصل. تحتوي الوسائط على الأجسام المضادة ، ويمكن جمعها يوميا لمدة أربعة أيام.