طريقة لإنتاج الأجسام المضادة المؤتلفة ضد الميتالوببتيداز

ابدأ بأنبوب يحتوي على عامل تعداء قائم على الدهون الموجبة وأضف بلازميدات التعبير المؤتلف.

يحمل البلازميد جينا يشفر الأجسام المضادة المؤتلفة التي تستهدف الميتالوببتيداز وبروتين الفلورسنت الأخضر أو GFP تحت محفز واحد ، بينما يكون جين مقاومة المضادات الحيوية تحت محفز آخر.

تتفاعل الدهون الموجبة الشحنة مع البلازميد سالب الشحنة ، وتشكل مركبا.

انقل المجمعات إلى صفيحة متعددة الآبار تحتوي على خلايا الثدييات ، مما يمكن البلازميد من دخول السيتوبلازم.

يصل البلازميد إلى النواة ويتم نسخه إلى mRNAs لبروتينات مقاومة المضادات الحيوية و mRNAs ثنائية الجنس التي تشفر الأجسام المضادة المؤتلفة و GFPs.

تؤدي هذه الرنا المرسال إلى إنتاج الأجسام المضادة المؤتلفة ، و GFPs ، وبروتينات مقاومة المضادات الحيوية.

بعد التعداء ، استبدل الوسيط بوسط غني بالمصل.

أدخل مضادا حيويا ، والقضاء بشكل انتقائي على الخلايا غير المنقولة بينما تبقى الخلايا المنقولة المقاومة للمضادات الحيوية.

باستخدام تقنية فرز الخلايا التي يتم تنشيطها بالتألق ، اجمع الخلايا الفلورية الخضراء التي تعبر عن الأجسام المضادة المؤتلفة.

قم بزرع الخلايا المخففة المنقولة في وسط خال من المصل واحتضانها لإنتاج أجسام مضادة مؤتلفة ضد الميتالوببتيداز.

قم بزراعة الأجسام المضادة المؤتلفة pET-28a (+) أمينوببتيداز في البكتيريا المحولة BL21 في وجود 0.4 مللي مولار بيتا-