موسوعة JoVE للتجارب
علم المناعة
0 مشاهدة • 3:32 دقيقة • July 8th, 2025
خذ تعليقا من الخلايا القاتلة الطبيعية ، أو الخلايا القاتلة الطبيعية.
أضف الأجسام المضادة أحادية النسيلة المضادة ل CD20 واحتضنها.
في حالة عدم وجود خلايا سرطانية مستهدفة تعبر عن مستضد CD20 ، ترتبط منطقة Fc من الأجسام المضادة بمستقبلات FcγRIIIa على سطح الخلية القاتلة الطبيعية.
بعد الحضانة ، أضف الوسائط المبردة. أجهزة الطرد المركزي وإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة.
بعد ذلك ، أضف الأجسام المضادة للإنسان κ السلسلة الخفيفة. حضن.
ترتبط هذه الأجسام المضادة الثانوية بالسلسلة الخفيفة κ للأجسام المضادة وحيدة النسيلة.
يحاكي تشابك الجسم المضاد ارتباط المستضد المستهدف ، مما يؤدي إلى سلسلة إشارات داخل الخلايا.
هذا يسبب التحفيز الاصطناعي لخلايا القاتل الطبيعي في حالة عدم وجود خلايا سرطانية.
تخضع الخلايا القاتلة الطبيعية المنشطة لإعادة ترتيب الهيكل الخلوي وتطلق حبيبات سامة للخلايا.
علاوة على ذلك ، تنتج الخلايا الكيموكينات والسيتوكينات.
بعد المدة المطلوبة ، أضف وسائط مبردة لوقف تحفيز الخلية.
الطرد المركزي الأنبوب. اجمع المادة الطافية وحبيبات الخلية لتحليل المصب لوظائف الخلايا الطبيعية المستجيب بوساطة الأجسام المضادة.
قم بتوزيع 100 ميكرولتر من الخلايا القاتلة الطبيعية المعلقة في أنابيب سعة 1.5 ملليلتر أو صفيحة قاع 96 بئرا على شكل حرف U ، وضع الخلايا على الجليد. تحضير ريتوكسيماب أو أي جسم مضاد آخر محل اهتمام بتركيز 100 ميكروغرام لكل ملليلتر.
أضف 1 ميكرولتر إلى كل أنبوب من الخلايا للحصول على تركيز نهائي قدره 1 ميكروغرام لكل مليلتر ، واحتضن الخلايا على الجليد لمدة 30 دقيقة. أثناء الحضانة ، قم بإعداد محلول من الجسم المضاد لسلسلة كابا الخفيفة المضاد للإنسان في الوسائط بتركيز 50 ميكروغرام لكل مليلتر. ستكون كمية محلول الجسم المضاد المطلوبة 50 ميكرولتر لكل عينة خلية.
قم بتسخين محلول الأجسام المضادة إلى 37 درجة مئوية على كتلة حرارية أو في حمام مائي. عند اكتمال حضانة الخلايا ، أضف 1 مليلتر من الوسائط الباردة المثلجة إلى كل أنبوب وقم بالطرد المركزي للخلايا عند 135 مرة جم و 4 درجات مئوية لمدة 5 دقائق. اغسل الخلايا مرة أخرى ب 1 ملليلتر من الوسائط المثلجة. استنشق المادة الطافية بعد الغسيل الأخير وأضف 50 ميكرولترا من محلول الأجسام المضادة لسلسلة كابا الخفيفة المضادة للإنسان لتنشيط الخلايا. ضع عينات الخلايا على الفور عند 37 درجة مئوية على كتلة حرارية أو في حمام مائي واحتضنها حتى النقاط الزمنية المطلوبة للتحليل أو الإجراءات الأخرى.
أفضل طريقة للتعامل مع عينات متعددة هي استخدام رف عائم في حمام مائي بزاوية 37 درجة ، والذي يمكن إزالته ووضعه على الجليد لإيقاف جميع التفاعلات على الفور.