تقنية لتوليد الأجسام المضادة وحيدة النسيلة من الخلايا البائية الخاصة بالمستضد

خذ نواقل التعبير حقيقية النواة ، التي تشفر إما سلسلة ثقيلة للجسم المضاد أو سلسلة خفيفة من الجسم المضاد ، مستنسخة من الخلايا البائية الخاصة بالمستضد.

إدخال بولي إيثيلينيمين, بوليمر كاتيوني, الذي يتفاعل إلكتروستاتيكيا مع النواقل سالبة الشحنة, تشكيل polyplexes.

احتضان خلايا الثدييات مع polyplexes ، التي تلتصق بالخلايا ويتم استيعابها عن طريق الالتقام الخلوي. تندمج الجسيمات الداخلية الناتجة مع الجسيمات الحالة.

تسبب البوليمرات الموجودة في البوليبلكس تورما تناضحيا في الحويصلة ، مما يؤدي إلى تمزقها وإطلاق النواقل.

تدخل النواقل التي تم إطلاقها إلى النواة ويتم نسخها إلى mRNA ثقيل السلسلة وسلسلة خفيفة ، والتي تخضع للترجمة عبر الريبوسومات على الشبكة الإندوبلازمية.

تتجمع سلاسل الببتيد الناتجة في أجسام مضادة ، يتم نقلها إلى جولجي وتعبئتها في حويصلات إفرازية.

عند اندماج الحويصلات الإفرازية وغشاء الخلية ، يتم إطلاق الأجسام المضادة خارج الخلية.

حصاد المادة الطافية المحتوية على الأجسام المضادة لإجراء فحوصات المصب.

قم بزرع 15,000 خلية كلى جنينية بشرية في 200 ميكرولتر من Dulbecco's Modified Eagle Medium مع 10٪ مصل بقري جنيني في كل بئر من صفيحة مسطحة القاع 96 بئرا ، قبل يوم واحد من التعدين. ثم احتضان اللوحة عند 37 درجة مئوية طوال الليل عند 5٪ ثاني أكسيد الكربون. قم بنقل الخلايا باستخدام كاشف تعداء مشتق من البولي إيثيلين الخطي. خفف 0.5 ميكرولتر من كاشف تعداء الحمض النووي ب 10 ميكرولتر من 150 ملليمولار من كلوريد الصوديوم.

بعد ذلك ، قم بتخفيف 0.125 ميكروغرام من كل متجه متغير للسلسلة الثقيلة والخفيفة في 10 ميكرولتر من 150 مللي مولر كلوريد الصوديوم. دوامة كل التخفيفات لمدة 10 ثوان لكل منهما. بعد ذلك ، امزج كاشف تعداء الحمض النووي المخفف مسبقا مع 10 ميكرولتر من محلول الحمض النووي. قم بدوامة خليط تعداء الحمض النووي بسرعة لمدة 15 ثانية ، واحتضانه لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.

أضف خليط تعداء الحمض النووي بالتنقيط على الخلايا ، ثم قم بتدوير اللوحة برفق. استبدل الوسط بعد 16 ساعة من التعدي ، وزرع الخلايا لمدة خمسة أيام في وسط خال من المصل عند 37 درجة مئوية.